NOK/STYK1单克隆抗体的制备及应用

根据NOK/STYK1(Novel Oncogene with Kinase Domain或Serine/Threonine and Tyrosine Receptor Protein Kinase)的结构特点设计并合成抗原,免疫Balb/C小鼠后,取免疫反应最好的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合.应用有限稀释法筛选得到能稳定分泌抗NOK/STYK1的单克隆杂交瘤细胞株7G9.该细胞株经过扩大培养后,通过小鼠腹水制备纯化出NOK/STYK1的单克隆抗体.Western blotting和ELISA检测结果显示,纯化出的单克隆抗体能够特异性识别NOK/STYK1,且效价较高.通过免疫荧光标记和免疫组化分析显示,该单克隆抗体能够有效检测多种肿瘤细胞内及恶性肿瘤组织样本中高表达的NOK/STYK1.     

新型帕唑帕尼衍生物的合成与活性初步研究

在研究帕唑帕尼构效关系的基础上,以3-甲基-6-硝基吲唑为原料,设计合成4个帕唑帕尼衍生物.化合物结构经过1H NMR、LC-MS及元素分析确证,并进行体外抗肿瘤细胞增殖活性研究.采用四氮唑盐(MTT)法测试了4个化合物对MGC803细胞增殖的抑制作用.结果表明,目标化合物对于MGC803细胞增殖均有一定的抑制作用.     

神经元τ蛋白过度磷酸化时14-3-3ξ的变化

为探讨τ(tau)蛋白异常磷酸化时神经元内14-3-3e蛋白含量的变化,采用GF-109203X和wortmannin联合注射大鼠侧脑室,诱导大鼠海马神经元τ蛋白发生过度磷酸化,同时观察14-3-3e蛋白含量的改变,结果显示：GF-109203X和wortmannin诱导了海马CA3区神经元τ蛋白在Ser396/404位点的过度磷酸化,同时14-3-3ξ蛋白的含量显著增高,这些结果提示τ蛋白过度磷酸化与抗凋亡蛋白14-3-3之间可能的内在联系。     

Ser28磷酸化组蛋白H3在哺乳动物有丝分裂细胞中的动态分布

利用特异性抗Ser28磷酸化组蛋白H3抗体,应用间接免疫荧光标记技术,标记人乳腺癌细胞 (MCF-7)和小鼠成纤维细胞(NIH 3T3),用激光共聚焦显微术研究这两种哺乳动物细胞中Ser28磷酸化组蛋白 H3在有丝分裂过程中的动态分布,以研究Ser28磷酸化组蛋白在细胞有丝分裂过程中的作用.结果表明,Ser28 的磷酸化作用是这两种细胞有丝分裂期的特有事件.组蛋白H3的Ser28磷酸化信号首先出现在早期的核外周, Ser28磷酸化在中期达到高峰,并扩展到染色体的所有部分,后期和末期逐渐减退,随着胞质分裂的完成而消失. 实验结果表明,组蛋白H3 Ser28的磷酸化与有丝分裂染色体的凝集和解凝集过程有着时间和空间上的相关性. Ser28磷酸化使得组蛋白H3氨基末端的正电荷数降低,这可能是导致染色质变构凝集的原因之一.有丝分裂期 间组蛋白H3在Ser28位置磷酸化过程与Ser10相比有明显的差异,因此在动物细胞中,组蛋白H3氨基末端这 两个不同丝氨酸残基的磷酸化可能有不同的生物学功能.     

酪氨酸水杨醛缩席夫碱锌多元配合物的合成与表征

对水溶液中酪氨酸水杨醛缩席夫碱配体与锌离子现场配位进行了研究,合成了3种Zn^2＋席夫碱配合物,通过元素分析确定了其组成,通过可见-紫外吸收光谱、红外光谱及热重分析进行了表征．     

促性腺激素处理对性未成熟小鼠子宫中STAT3表达和激活的影响

信号转导和转录激活因子3（STAT3）在动物的早期胚胎发生、细胞生长、凋亡控制和细胞运动等过程中起着很重要的作用。以小鼠为材料,利用原位杂交和免疫组化等方法,研究了促性腺激素对性未成熟小鼠子宫中STAT3表达和激活的调节。用PMSG处理性未成熟的小鼠,可刺激子宫腔上皮和腺上皮中STAT3的表达上调、发生酪氨酸磷酸化和核转位而激活。hCG单独处理也能导致STAT3表达的上升和酪氨酸磷酸化的发生,但反应较慢。PMSG处理48h后再以hCG处理24h内能促进子宫腔上皮、腺上皮、基质和肌层细胞中STAT3的表达和激活。研究表明,促性腺激素处理能够上调小鼠子宫中STAT3的表达和激活,促性腺激素处理后小鼠子宫的增殖可能与Jaks-STAT3通路的激活有关。     

ATM介导的蛋白磷酸化在辐射损伤信号传递过程中的作用

为了阐明ＡＴＭ在介导辐射损伤信号传导中的作用,对ＡＴＭ,ｃ－Ａｂｌ免疫淀物激酶活性,辐射及损伤ＤＮＡ对其活性的影响进行了分析。结果表明辐射呆引起细胞中多种蛋白磷酸化发生改变,ｐ５３上游基因ＡＴＭ突变的ＡＴ细胞与ＡＴＭ基因正常的同源细胞ＨＥＬ相比,ＡＴ细胞受照后多种蛋白的磷酸化明显减弱。ＡＴＭ与ｃ－Ａｂｌ共沉淀物激酶活性催化ｐ５３在内的多种蛋白磷酸化。ＡＴＭ,ｃ－Ａｂｌ共沉淀物激酶活性可为辐射及损伤     

枸杞多糖对四氯化碳和高糖致损大鼠肝细胞的作用

在四氯化碳(CCL₄)和高糖(HG)损伤的离体肝细胞模型上,研究CCL₄和HG对肝细胞葡萄糖激酶活性、钙离子浓度以及酪氨酸磷酸化水平的影响,并对枸杞多糖（LBP）的保护作用进行探讨.实验结果表明,CCL₄和HG均使肝细胞内葡萄糖激酶活性下降,Ca超载,并使细胞内酪氨酸磷酸化水平降低.LBP可以改善CCL4和HG引起的葡萄糖激酶活性和钙离子浓度的变化,以及CCL₄引起的胰岛素信号通路中的酪氨酸激酶活性的下降,但不能改善高糖引起的酪氨酸激酶活性的下降.由此认为,LBP对受到自由基直接损伤的肝细胞有较好的保护作用,而对高糖环境引起的肝细胞损伤不能完全修复,这可能与CCL₄和HG的作用机制不同有关.     

细胞的跨膜信号转导功能

本文从几个主要方面对细胞的跨膜信号转导进行了探讨。     

质谱技术探索蛋白磷酸化信号机制的研究进展

蛋白质磷酸化信号网络在植物生长发育和抵御外界环境变化过程中起重要调控作用,解析这些复杂的信号通路及其作用机理一直是生物学研究领域的重点和难点.近年来,已经发展多种方法用于分析蛋白磷酸化的动态变化和功能机理.本文总结了研究植物蛋白磷酸化信号网络的不同方法和最新进展:首先概述磷酸化蛋白的富集纯化技术和检测方法,评价每种方法的优缺点;其次重点讨论研究磷酸化蛋白质组学和互作组学的不同质谱方法和这些方法在植物生物学领域的研究进展,并结合案例分析其应用范围.此外,还归纳和探讨这些技术的不同特性以及在蛋白磷酸化研究中的优势,并对这方面的研究热点作了展望,为深入研究蛋白磷酸化修饰在植物生物学中的分子机制提供重要的指导作用.