重组逆转录病毒介导的人组织型纤溶酶原激活剂基因转移及在哺乳动物细胞中的持续表达

心脑血管疾病是全球发病率和死亡率最高的疾病,其中血栓性疾病危害最大,近年来迅速崛起的基因治疗为这类疾病的有效防治带来了希望。人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,t-PA)是目前晕为有效的溶栓药物之一,其缺点是价格昂贵、半寿期短,而血栓性疾病住住需要长期给药,故难以推广使用。如果将t-PA基因导入体细胞持续表达具有纤溶活性的产物供机体利用,可望达到防治血栓性疾病的远期效果。重组逆转录病毒载体已成功地用子多种疾病的基因治疗。为了探索这一途径治疗血栓性疾病的可行性,本研究首先用含有t-PA基因的重组逆转录病毒感染体外培养的哺乳动物细胞,然后对感染细胞纤溶活性的变化进行了长期观察。     

逆转录病毒复制早期阶段中有关的细胞因子

逆转录病毒复制的早期阶段包括：病毒一细胞膜融合、逆转录、病毒的双链DNA整合插入宿主细胞染色体。在这些过程中，逆转录病毒必须利用若干细胞因子，诸如特异的细胞表面受体、细胞骨架的某些组分和核质转运有关因子。本书是关于逆转录病毒复制早期作用机制的专著。     

重组逆病毒介导的Immunocaspase-3分泌性T细胞对ErbB2阳性乳腺癌的杀伤作用

将Immunocaspase-3基因转染Jurkat T淋巴细胞, 使其稳定地分泌性表达靶向促凋亡蛋白Immunocaspase-3, 间接免疫荧光检测表明该蛋白可内化进入ErbB2阳性的SKBr3乳腺癌细胞, 细胞计数结果表明乳腺癌细胞的生长和增殖受到明显抑制. 进一步将Immunocaspase-3基因克隆入逆转录病毒载体pLNCX, 转染PA317细胞进行包装, 挑选高滴度的包装细胞株收获病毒. 用收获的病毒感染刺激分裂的人外周血T淋巴细胞, 经筛选后通过尾静脉注射给荷有SKBr3乳腺癌的裸鼠, 观察到肿瘤生长明显受到抑制(抑制率 73.25%), 裸鼠存活时间较对照组延长80.95%. 免疫组织化学染色结果表明裸鼠肿瘤组织中有Immunocaspase-3蛋白分布, TUNEL检测证实肿瘤细胞发生凋亡. 上述结果表明, T淋巴细胞分泌的Immunocaspase-3在裸鼠体内可以识别和进入ErbB2阳性的乳腺癌细胞, 抑制肿瘤生长.     

首例艾滋病“功能性治愈女童”病情复发

<正>美国一名儿童于2013年"成功治愈"艾滋病,但最新诊断结果表明,停止药物治疗之后儿童体内又发现了艾滋病毒,这将成为医学界的一个重大挫折。据悉,这个女童出生于美国密西西比州,她在母体中就已感染艾滋病毒,医生对她持续使用18个月抗逆转录病毒药物治疗,2013年3月,专家宣称,这位女童成为全球首例"功能性治愈"的艾滋病案例,血液中再未发生艾滋病毒。但近期她在密西西     

病毒学对分子生物学发展的贡献

本文通过回顾病毒学发展史上的重大事件,尝试从以下几个方面说明病毒学的新发现对分子生物学发展所做出的贡献：①噬菌体感染实验和植物病毒重建实验证明了核酸是遗传信息的载体;②逆转录病毒的发现使人们认识到遗传信息的流动不是单向的;③逆转录酶已经成为基因克隆中重要的工具酶;④朊病毒的发现使人们认识到蛋白质很有可能成为核酸之外遗传信息的载体,扩展了人们对中心法则的认识;⑤各种野生型病毒被改造成为基因工程载体,广泛应用于基因工程．     

构建逆转录病毒PBabepuro-Bcl-2表达质粒及稳定转染细胞株

目的:构建pBabepuro-Bcl-2逆转录病毒表达质粒,鉴定表达,在小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中建立过表达Bcl-2稳定转染细胞。方法:以人上皮细胞的cDNA为模板,利用X-tremeGENE HP(Roche)转染293T细胞,蛋白质免疫印迹法在蛋白水平检测表达,利用逆转录病毒感染NIH3T3细胞。结果:成功构建了逆转录病毒表达质粒pBabepuro-BCl-2,蛋白水平检测证实其在293T细胞可以有效地表达,成功建立了过表达Bcl-2的NIH3T3稳定转染细胞。结论:通过构建pBabepuro表达质粒及在NIH3T3建立过表达Bcl-2稳定转染细胞,为进一步研究Bcl-2的功能调控奠定了基础。     

单嗜性包装细胞包装逆转录病毒方法研究

逆转录病毒的感染范围(嗜性)是由所使用的包装细胞表达的包膜蛋白所决定的,因此改变现有的包装细胞的包膜蛋白就可以改变所包装的逆转录病毒的嗜性。为了达此目的,在稳定表达MMLV包膜蛋白的逆转录病毒包装细胞BOSC23细胞中共转染VSV-G表达载体和表达GFP的逆转录病毒载体,结果包装出的逆转录病毒只能感染少量的人源性的293F细胞,说明VSV-G不能完全替换掉MMLV包膜蛋白。因此我们利用RNA干扰技术首先沉默BOSC23细胞中的MMLV包膜蛋白的表达,然后共转染VSV-G表达载体和表达GFP的逆转录病毒载体,结果包装出了高滴度的泛嗜性的逆转录病毒。     

警惕:结核病的死灰复燃

就在人类开始赢得抗结核战争胜利的时候,耐药性结核菌的出现又成为人类面临的一大威胁。在南非夸省吉拉渡口区的苏格兰教会医院,结核病(TB)又有抬头的趋势;在偏远的夸祖鲁-纳塔尔省的医院,医生们对死于枪击和艾滋病病例已司空见惯。即便如此,当对抗逆转录病毒药物敏感的艾滋病患者迅速死于结核病时,仍然使他们感到疑惑和恐惧。     

携带TIMP-1基因逆转录病毒载体的构建及其实验研究

构建携带组织金属蛋白酶抑制物ＴＩＭＰ－１基因的逆转录病毒载体，并用于感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系，观察其侵袭、转移能力的变化．利用常规分子克隆技术，通过对逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ（Ｆ６）质粒的去磷酸化、粘端连接，构建ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ／ｈＴＩＭＰ；经限制性内切酶酶切、电泳鉴定其结构正确后，用电穿孔法对体外培养的ＰＡ１３７包装细胞进行基因转移，Ｇ４１８筛选阳性克隆，收集上清，并用于感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系的研究．构建获得ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ／ｈＴＩＭＰ，有效滴度为１０４ＣＦＵ／ｍＬ～１０６ＣＦＵ／ｍＬ．本研究构建获得的ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体，在感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系，观察其侵袭、转移能力的研究中得到有效应用