重组腺病毒AdKDR-TK联合IL-12逆转录病毒血管靶向治疗裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤的实验研究

目的 探讨重组腺病毒AdKDR-TK联合IL-12逆转录病毒通过血管靶向治疗裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤的疗效及作用机制.方法 SCID小鼠腋部皮下植入1×107(0.2 mL)HepG2细胞,同时腹腔注射PBL 2×107(0.5 mL),当瘤体达0.5cm3时,随机分成4组,分别为更昔洛韦(GCV)组(第1组)、IL-12逆转录病毒组(第Ⅱ组)、重组腺病毒AdKDR-TK组(第Ⅲ组)及重组腺病AdKDR-TK联合IL-12逆转录病毒组(第Ⅳ组).各治疗组瘤内分别注入重组病毒液或/及重组逆转录病毒液0.1 mL,第二天重复注射一次,重组腺病毒治疗在病毒给予24 h后分别在腹腔内注射GCV,连续10 d;对照组腹腔内注入GCV.观察各组瘤体生长情况及免疫组化法测定肿瘤微血管密度(MVD).结果 第□组经治疗后肿瘤的生长受到明显的抑制,其抑瘤率为62.14%,与第Ⅱ组及□组比较,后两者的抑瘤率分别为18.32%和32.73%(与第Ⅳ组比较,两者P<0.01).肿瘤组织内的MVD,第Ⅰ组为(40.1±6.7)个/m㎡、第Ⅱ组为(32.2±7.3)个/m㎡、第Ⅲ组为(27.6±7.1)个/m㎡、第□组为(7.7±4.1)个/m㎡,其中第□组与第□组(P<0.05)、第□组与第□组(P<0.01)、第□组与第□组(P<0.01)之间的肿瘤内MVD比较均有统计学差异.结论 IL-12逆转录病毒能够增强重组腙病毒介导以KDR为启动子的胸苷激酶系统的血管靶向性地有效抑制肿瘤的生长.     

人endostatin基因重组逆转录病毒载体的构建及其在NIH3T3细胞中表达

为探讨转人血管内皮抑制基因（endostatin）在转染细胞中的表达，利用逆转录病毒载体构建人endostatin基因的重组质粒，通过脂质体（lipofectamine）将重组质粒导入包装细胞PA317,制备重组病毒液。用重组病毒液感染NIH3T3细胞，经G418筛选获得转入endostatin基因细胞株NIH3T3-endo。同法制备对照细胞株NIH3T3-pLncx.PCR检测NIH3T3-endo细胞基因组，在扩增产物中一份550bp人endostatin基因特异性片段，对照组为阴性。免疫组化测定示仅NIH3T3-endo细胞中有外源性endostatin蛋白的表达，说明人endostatin基因已被成功导入NIH3T3细胞，并获得稳定表达。     

绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子逆转录病毒载体pLNCX-EGFP-C1-hri的构建及鉴定

构建表达重组绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子的逆转录病毒载体pLNCX-EGFP-c1-hri,为探讨人核糖核酸酶抑制因子抗肿瘤作用机制打下基础.用亚克隆法,将目的片段egfp-c1-hri从表达载体pEGFP-C1-hri克隆到pLNCX上,用酶切筛选得到阳性克隆后,用脂质体法将其转染到小鼠黑色素瘤细胞B16中,用800 mg/L G418筛选2周后,在荧光显微镜下检测其表达.双酶切鉴定得到pLNCX-EGFP-C1-hri阳性克隆,荧光显微镜显示绿色荧光在B16细胞质中高效表达.成功构建逆转录病毒表达载体pLNCX-EGFP-C1-hri.     

猪内源性逆转录病毒与异种移植安全性问题

异种移植是将动物的活细胞、组织或器官移植给其它种类受者,其临床应用可以有效缓解同种供体移植物短缺,治疗人类终末期疾病。猪来源方便,易于繁育,与人体解剖和生理有很高的相似性,可选择合适大小的器官,因此成为异种移植较好的供体源。猪胰岛细胞临床应用治疗胰岛素依赖型糖尿病[1]、猪肾体外灌注用于治疗肾衰[2]、猪生物人工肝用于治疗人肝坏死[3]、猪心瓣用于治疗人心脏病[4]、猪神经细胞用于治疗人帕金森病[5],这些尝试给异种移植带来希望。然而,异种移植面临三个主要障碍,即移植物进入受者体内引发的免疫排斥反应,包括超急性排斥反应…     

FBXO6稳定表达肿瘤细胞系的构建及其亚细胞器定位

检测FBXO6在多种肿瘤细胞中的表达和定位情况并构建稳定表达FBXO6的肿瘤细胞株。运用RT-PCR方法,在人胚肾293T细胞以及9种不同来源的肿瘤细胞中,检测了FBXO6的表达情况。以载体质粒pBabe-3Flag-FBXO6-puro/pBabe-3Flag-con、包装质粒pCMV-GAG-POL及包膜质粒pCMV-VSVG用Lipofectamine2000共转染包装细胞系293T,收集病毒颗粒感染A549细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,Western blot鉴定FBXO6的表达。利用激光共聚焦荧光显微镜,采用间接免疫荧光方法,检测外源性FBXO6在A549中的亚细胞定位。在10种不同来源的细胞株中,FBXO6在A549细胞中的表达最高。成功筛选出嘌呤霉素抗性细胞系A549-Con与A549-3Flag-FBXO6。Western blot方法发现A549-3Flag-FBXO6细胞系稳定表达FBXO6蛋白。间接免疫荧光发现FBXO6与内质网tracker有共定位。FBXO6在肺癌A549细胞中高度表达,构建了稳定表达FBXO6的A549细胞系,部分FBXO6分布在内质网中。     

含两类耐药基因逆转录病毒载体的构建及在人脐血CD34+细胞中的表达

将耐药谱截然不同的３种耐药基因（ｍｄｒｌ, ｍｇｍｔ, ｄｈｆｒ）两两组合,以逆转录病毒介导在人脐血ＣＤ３４＋细胞中表达,增强了细胞对相应两种不同类型化疗药物的抗性,使造血细胞受到多重保护,为研究肿瘤化疗中如何更大程度地保护正常组织,降低药物毒副作用,提高治疗效果提供实验基础．     

反义c—myc重组逆转录病毒的制备及浓缩保存

将人ｃ－ｍｙｃ基因中从部分第一内含子到第二外显子和它３旁侧第二内含子的前８个核苷酸共１．５３ｋｂ片段，反向克隆于逆转录病毒离体ｐＤＯＲｎｅｏ中，构建了重组逆转录病毒载体ｐＤＯＲ－ＢＤ９，在Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导了将其导入包装细胞ＰＡ３１７，经过两轮亚克隆筛选，获得了单克隆，病毒滴度为１０＾６ＣＦＵ／ｍＬ的重组病毒分泌细胞株ｐＡＣ－ＢＤ９，它能稳定，高效地分泌含有目地基因片段的重组逆转录病毒颗粒ｐ     

人乳铁蛋白基因的克隆及序列分析与重组逆转录病毒质粒载体PLNCX2-hLF的构建

从正常人外周血中性粒白细胞中提取总RNA，用RT-PCR的方法扩增人乳铁蛋白（hLF）cDNA，将其克隆到pMD18-T Simple载体上并测序．用限制性内切酶Xho Ⅰ和Hind Ⅲ将目的片段与逆转录病毒载体PLNCX2进行双酶切、并用T4连接酶进行连接；然后转化到top10菌中，再次进行DNA序列测定．前后两次序列测定结果一致，没有突变，全长为2，136bp，说明所克隆的为hLF基因的cDNA序列；与GeneBank中登录的序列相比，同源性达99％以上．     

“功能性治愈”艾滋病成果凸显

正编辑圈点:逃脱艾滋的魔掌,似乎一直是个空想。但科学家们不信邪。2010年底,德国的胡特医生宣布世界首例被彻底治愈的艾滋病患者诞生,人们欣喜一阵而后绝望如常,毕竟是个