N-terminal of L protein of vesicular stomatitis virus contains a new signal sequence

The L protein (241kD) of vesicular stomatitis virus (VSV) is the most important snbnnit of the replication complex. The existence of specific localization signal in the L protein was investigated by making recombinant constructs expressing truncated mutants of the L protein fused to green fluorescent protein (GFP) in transient transfection assays. The chimeric genes encoding varied N-terminal of L and GFP gene were put under the control of T7 promoter or CMV promoter. The fusion proteins were transiently expressed in BHK-21, COS-7, CHO or Hep G2 cells. When more than 120 residues were deleted or only 96 residues were kept on the N-terminal, the fusion proteins were shown to be distributed throughout the cells, cytoplasm and nucleus under the confocal microscope. However, other chimeric proteins with 120 or more amino acids were dotted and distributed in the perinuclear regions. And the fusion protein with 96—120 aa has the similar distribution. A thirteen-residue peptide QGYSFLHEVDKEA (108—120) was identified as localization signal, whose function would be absolutely distributed with the deficiency of D or V. Our results show that there is an independent localizing signal in N-terminal domain of L protein of VSV and this functional signal is conserved in different cell lines.     

Inhibitory effect of the adenovirus type 5 E1A protein expressed in the yeast system of the human tumor cell growth

Adenovirus 5 type E1A as a tumor suppressor gene can inhibit tumor growth and enhance the censitivity of chemotherapy and radiotherapy.E1A have the ability to integrate into the host genome,resulting in long-time expres-sion that induces Rb gene inactivation and animal cells im-mortalization.This prompted us to select the E1A protein for treatment of cancer in order to overcome the limitations of E1A gene therapy.Thus,we firstly comstructed E1A eu-caryotic expression vector (pPIC9/E1A),transformated the pichia pastoris yeast cells(GS115) and screened the high-expressing recombinant strains.The positive yeast strains were cultured in the shake flask,and induced for 3d.The crude E1A protein was purified using two steps of col-umu chromatography on HiTrap Q and HiTrap SP.The pu-rified E1A protein was identified by SDS-PAGE and Western blot.E1A protein was mostly located at cellular unclear when Cheriot delivered E1A protein into cells.The analysis in vitro indicated that the E1A protein arrested LN686 cell cycle at G2/M phase,and significantly inhibited the growth of LN686 tumor cells.The current studies firstly provided an experimental basis to further develop E1A protein for tumor treatment.     

鸭病毒性肝炎诊断与防制的研究进展

鸭病毒性肝炎是雏鸭的一种高致死、高度传播的病毒性疾病,并常和其它病毒、细菌混合感染,严重影响了养鸭业,造成了巨大的经济损失,从鸭病毒性肝炎的发病机理入手,简要概述了鸭病毒性肝炎综合诊断方法,包括流行病学,病原检测,病理组织形态学等方法,及预防和治疗的研究情况。     

两种环缘蝽的染色体研究(半翅目:姬缘蝽科)

本文研究了中国姬缘蝽科开环缘蝽Stictopleurus punctatonervosus minutus Blote和闭环缘S．viridictatus(Uhler)的核型及其染色体的减数分裂行为．结果表明：两个种的染色体数目均为2n(♂)=13，具有一对m染色体和XO性别决定机制，但是在染色体行为方面却表现出了各自的特异性．     

中国无病毒果树研究的进展

病毒病对果树生产的危害日趋严重，各国对病毒病害的研究和防治极为重视。本文主要论述了中国在果树病毒的检测、脱除以及抗病毒基因工程、生长结果习性和生理生化特性等方面的研究进展和取得的成就，同时指出今后应注意的一些问题。     

植物维管组织特异性定位启动子研究进展

组织特异性基因的启动子对该基因的组织特异性表达起重要作用 .本文综述了植物维管组织特异性定位表达启动子的研究进展 .研究表明 ,在植物维管组织特异性定位表达启动子中 ,顺式调控元件与反式作用因子协同作用 ,调控基因的表达 .     

从无机分子到生命分子

自从维勒从无机氰化物合成尿素,生命的活力论就彻底破产了。随之出现了生物化学的蓬勃发展,这以后合成生命,哪怕是最简单的生命就成为科学家孜孜以求的梦想,然而,这方面的突破还是让人们大吃一惊。     

SARS病原学和病理学研究现状

2003年2月28日,在河内一家只有60张病床的越南法国医院,遇到一例奇特的流感样病毒感染的危重患者.WHO驻河内的传染病专家乌尔巴尼(C.Urbani)博士意识到这是一种新型的传染性肺炎,立刻向WHO亚太区委员会报告,并命名为重度急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS).在之后的几周里,乌尔巴尼博士和另外5名医护人员先后死于这种当时不明原因的传染性疾病.3月7日WHO向全球发出SARS的警告.截止6月下旬,这种传染性非典型肺炎已累及33个国家和地区,有八千多人感染此病,七百多人死亡.我国是该病出现最早、病人最多的地区,在SARS病原学研究和临床防治中积累了宝贵经验,但对于这种新疾病在许多方面尚缺乏深入认识.本文综合目前国内外最新的研究发现,对SARS的病原学和病理学研究现状作一简要介绍.     

水疱性口炎病毒L蛋白N端存在新的定位信号

水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV) L蛋白是该病毒复制酶的主要成分, 分子量约为241 kD. 通过构建L蛋白缺失突变体与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的方式, 将融合蛋白置于T7启动子或CMV启动子下游, 在多种动物细胞中瞬时表达了重组的融合蛋白. 荧光显微镜观察结果显示, 仅保留N端96个氨基酸残基或缺失N端120个以上残基时, 融合蛋白均匀分布于整个细胞质中, 而含有N端120个以上残基时, 融合蛋白呈点状或局部分布于核周围部位. 截取L蛋白96～120氨基酸片段, 连接到GFP蛋白氨基端, 同样融合蛋白亦特异性地分布到核周围局部区域. 进一步研究含定位信号的25个残基片段发现, 仅13个残基的肽段QGYSFLHEVDKEA(108 ~ 120)就具有定位功能, 缺失D或V均导致定位信号完全丧失. 含有这13个残基的GFP融合蛋白, 在多种细胞和不同表达模式下均显示了同样的分布规律, 表明L蛋白N端这种定位信号具有独立的定位功能, 并且在不同细胞中是保守的.     

重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽在毕赤酵母中的表达

目的：在巴期德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽，方法：用SacI和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒，电打孔法导入毕赤酵母GS115后，在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子，然后根据甲醇利用快速型（Mut^ ）和甲醇利用缓慢型(Mut^s）菌株的不同生长特点，筛选出Mut^ 和Mut^s型转化子，用PCR法进一步鉴定阳性克隆，分别用甲醇诱导Mut^ 和Mut^s型转化子表达目的蛋白4d，取培养产物冻干浓缩，进行SDS-PAGE和Western blotting，筛选出能特异表达目的的蛋白的菌株，分析蛋白的含量及纯度。结果：重组人巨细胞病毒可在甲醇利用快速型毕赤酵母中有效表达，其表达量约占培养上清分泌蛋白的76.5%，结论：重组人巨细胞病毒（HCMV）嵌合肽可在真核细胞毕赤酵母中成功表达。