应用多重的等位基因特异PCR诊断苯丙酮尿症

点突变是导致人类遗传病的主要基因突变类型,其检测方法的探索一直是基因诊断研究中的重要课题。本文报道一种简便、快速检测点突变的新方法——多重的等位基因特异聚合酶链反应(Multiplex allele—specific polymerase chain reaction,MASPCR)。等位基因特异聚合酶链反应(Allele-specific polymerase chain reaction,ASPCR),又     

限制酶SmaⅠ参与的PCR产物克隆技术

介绍了一种增加连接效率的ＰＣＲ产物克隆技术，即ＳｍａⅠ内切酶参与的ＰＣＲ产物与ＳｍａⅠ酶切的载体的连接；并通过克隆黄鲜基因组中一段约２５０ｂｐ的ＰＣＲ产物的实例证实了该技术的可靠有效性。     

拟南芥多聚ADP核糖聚合酶活性调控植物的抗旱性

为了观察植物多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的酶活对植物生长的作用,利用PARP抑制剂来抑制拟南芥PARP的体内活性,并观察表型.体外生化实验结果表明,3-氨基苯甲酰胺(3-Aminobenzamide,3-AB)可以抑制拟南芥PARP1和PARP2的多聚ADP核糖化修饰活性;利用3-AB来处理拟南芥,发现抑制剂处理过的植物表现出更强的耐旱能力.为了排除3-AB的非特异性作用,使用PARP的另外一个抑制剂苯甲酰胺(Benzamide,BA)对拟南芥进行处理,结果显示,BA处理后拟南芥也表现出相似的抗旱表型.另外,在正常生长条件下,3-AB或BA处理过的拟南芥生长量较大,植株鲜重明显增加.以上结果说明,抑制拟南芥PARP活性可以促进拟南芥抗旱能力的改善,其抑制剂具有潜在的应用价值.     

研究揭示RNA聚合酶Ⅱ关键延伸过程

来自美国堪萨斯大学医学中心、斯托瓦斯医学研究所(Stowe rs Institute for Medical Research)获得了转录过程的研究新发现:转录因子MED26在RNA聚合酶Ⅱ合成RNA的过程中扮演了重要的角色,它能直接连接超长延伸复合物(super-elongation complexes,SECs),参与     

PPP2R5C转录本在正常人和血液肿瘤病人中的分布情况

目的:建立分析不同PPP2R5C转录本检测方法,分析正常人和血液肿瘤病人中5种PPP2R5C基因转录本的表达特点.方法:根据PPP2R5C基因的结构特点,设计4对引物,利用RT-PCR方法分析9例正常人、7例T细胞-非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)、11例B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和8例急性髓细胞白血病(AML)病人外周血单个核细胞(PBMC)中PPP2R5C基因的表达情况.结果:所设计的4对引物,均可在样本中扩增到预期PCR产物,其中第1对引物可扩增两个不同大小PCR产物(包含12+13+14外显子的大片段及仅含12+14外显子的小片段),而另3对对引物所扩增的产物分别为10+11+12+12a外显子,Ⅲ+2外显子和Ⅳ+2外显子的基因片段,所有PCR产物均通过核苷酸序列分析证实.结果显示所有样本均表达全部PPP2R5C转录本.结论:初步建立区分不同PPP2R5C转录本的方法,各转录本在正常人和不同血液肿瘤病人中的分布情况基本一致.     

Balb/C小鼠金属硫蛋白-1 cDNA的克隆及序列分析

以 RNA一步提取法 ,采用 RT-PCR技术成功地将 Balb/ C小鼠金属硫蛋白 -1 c DNA基因片段克隆于质粒 p UC-1 9上 ,并对克隆片段 c DNA进行核苷酸序列测定     

NIH3T3细胞与其癌变细胞的PARP酶被抑制后DNA损伤修复的差异研究

PARP酶 (聚ADP核糖基聚合酶Poly ADP ribosepolymerase ,PARP)对于DNA损伤修复具有重要功能 ,正常细胞及其癌变细胞的该酶对抑制剂的敏感程度可能会有差异 .为此 ,通过姐妹染色体交换频率 ,带报告基因的质粒转化频率 ,以及彗星测定等方法 ,对DNA的损伤修复进行初步的检测 .实验结果表明 ,正常细胞和癌变细胞PARP酶在抑制剂作用下酶活性都会降低 ,但是癌变细胞的PARP酶对抑制剂更为敏感 .