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341.
真核细胞的依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱ在无蛋白质因子存在的条件下,在体外不能忠实转录DNA。然而,令人惊异的是植物来源的RNA聚合酶Ⅱ能在体外忠实转录类病毒RNA,产生全链长的产物。这一发现意味着类病毒RNA能提供类似启动子的位点,以便与RNA聚合酶发生特异性的相互作用,从而正确地起始转录。毫无疑问,这一系统将是了解真核细胞RNA聚合酶Ⅱ所催化的体外转录机制的理想模型之一。 相似文献
342.
本文报道一种简便、快速、可靠,同时又适合大量转基因植株中外源基因测定的PCR检测技术,同时改进了转基因植物中总DNA提取方法,并且用窄缝转移杂交测定了转基因植株中外源基因拷贝数。 相似文献
343.
应用PCR技术扩增DYZ 3 DNA特异顺序进行人类性别鉴定的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文综合了Kogan等(1987)和Michal等(1989)的研究结果,设计合成了Y染色体α-卫星DNA特异的引物和Alu家族DNA特异的引物用于性别鉴定.该方法克服了原方法的不足,操作简便,成本低廉,能在更短的时间内完成实验. 相似文献
344.
345.
报道BMP-3及BMP-5在不同组织细胞中的表达.将人的神经母细胞瘤SK细胞的总RNA及人的脑、肝、胸腺、脾、胎盘及睾丸的总RNA反转录成cDNA作为模板,利用设计的编码BMP-3和BMP-5成熟蛋白的专一性引物分别扩增出相应的片段.PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果表明,BMP-3及BMP-5在不同组织细胞中表达类型不同. 相似文献
346.
以大白菜3411-7自交系为材料,使用PE公司生产的Thermal Cycler480型PCR仪,对影响大白菜RAPD扩增的因素进行了研究,确定了模板,Mg^2 ,dNTPs,引物和Taq DNA聚合酶的适宜浓度和最佳的循环次数。实验结果表明,在25μL反应体系中使用20-60mg的模板DNA,1.5-2.0mmol/L的Mg^2 ,0.15-0.25mmol/L dNTPs,0.8-1.0μmol/L随机引物,1.0-1.5U Taq DNA聚合酶,在94℃下预变性5min后执行94℃ 1min,37℃ 1min,72℃ 2min,35个循环,最后72℃再延伸5min的条件下,大白菜的RAPD扩增效果较好。 相似文献
347.
348.
滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX cDNA的克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法获得SYT-SSX的cDNA,克隆入PUCm-T载体后,在美国ABI DNA自动测序仪上以反向引物测序法进行核苷酸序列的测定,扩增出98bp的特异性片段,并筛选出阳性重组克隆质粒PUCm-SYT-SSX。获得的滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX的cDNA,为深入揭示滑膜肉瘤分子发生机理奠定基础,同时可进一步完成原核表达。 相似文献
349.
多种因素均能影响PCR反应的顺利进行,尤其是菌体中的各种杂蛋白以及在模板提取过程中混入的各种化学试剂,对TaqDNA聚合酶均有很强的抑制作用,本文以扩增细菌的16SrDNA为例,说明了这些成分对PCR的抑制,同时提出了克服不利因素的方法。 相似文献
350.
An efficient method was developed to detect point mutations using oligonucleotide microarrays and the ligase detection reaction (LDR). Allele-specific LDR primers were immobilized on polylysine-coated glass slides to perform LDR on a chip. The spotting concentration and detection limit were analyzed using a synthesized oligonucleotide as a template. The optimal primer spotting concentration was 20 μmol/L and the lowest detectable template concentration was 0.33 nmol/L. The method was successfully employed to identify malignant mutations of hypertrophic cardiomyopathy. Asymmetric polymerase chain reaction was employed to prepare single stranded DNA as LDR templates from cloned plasmids. The discrimination ratios for AC, TC, GT, TT, GA, and AA mismatches are 32.82, 44.24, 17.75, 18.34, 11.66, and 8.91, respectively. This method may allow construction of multiple mutation detection systems. 相似文献