MassCLEAVE作为CFTR基因突变体检测方法的研究

研究基于开发检测囊状纤维跨膜电导调节因子(CFTR)基因突变体高度敏感的新型特异性MassCLEAVE法.此法利用聚合酶链反应(PCR)扩增法和体外转录法使在4列互相无影响的裂解反应中制造的碱基特异性酶解产物基于自身核苷酸序列在基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)中可产生相关特异性质谱峰值.比对产出峰值与参考峰值,利用4组裂解反应结果来确定并补充每个碱基变化的精确位置和类型.CFTR基因突变体检测所需的扩增子均可成功设计,并成功测试了含有48个CFTR基因突变体的样品,所有的基因突变体均可通过其鉴别信号明确被检出.MassCLEAVE法可用于快速检测多种已知CFTR基因突变体,并同时可鉴定出新的未知基因突变体和区分已知基因突变体的非致病性等多态现象.     

大鼠耳蜗血管纹胆碱能M受体的表达及意义

目的:研究胆碱能M受体在耳蜗血管纹的表达.方法:采用RT-PCR技术检测大鼠耳蜗血管纹上胆碱能M受体的基因表达.结果:扩增出标志M2、M3、M4和M5受体亚型基因表达的PCR产物,未扩增出标志M1受体亚型的产物.结论:胆碱能M2、M3、M4和M5受体亚型在耳蜗血管纹有表达,提示胆碱能M受体可能参与了血管纹功能的调节,为研究胆碱能M受体在血管纹上的功能提供分子生物学基础.     

DNA聚合酶Ⅰ的功能与结构的发现

本文具体介绍了DNA聚合酶Ⅰ的功能与结构的发现过程,包括聚合酶活性中心模型的提出;聚合酶分子量的测定;聚合酶的分离及其活性片段的获得;聚合酶Klenow片段晶体结构的测定以及DNA结合部位与活性位点的确立;Klenow片段结合DNA的晶体结构以及噬菌体T7DNA复制的晶体结构的测定,在测定这些复合物共晶体的基础上,提出了DNA与聚合酶结合的右手模型。     

常见赤潮藻类的变性梯度凝胶电泳分析

为了解我国典型有毒有害赤潮藻类的变性梯度凝胶电泳( DGGE)指纹图谱以及DGGE技术在赤潮藻类分析鉴定中的作用,本课题组运用DGGE技术,研究了我国沿海7种重要赤潮藻类的单一种类以及混合种类样品的18S rDNA V3区的DGGE指纹图谱,并且对2009年10月底在广东省珠海海域发生的双胞旋沟藻(Cochlodinium gemtnatum)赤潮样品进行了DGGE分析.结果表明,DGGE技术能够对环节环沟藻、海洋原甲藻、血红哈卡藻、锥状斯氏藻、中肋骨条藻、塔玛亚历山大藻、双胞旋沟藻7种常见的海洋赤潮藻类具有较好的区分效果,同时监测出赤潮样品中双胞旋沟藻、血红哈卡藻、环节环沟藻和海洋原甲藻4种优势种,种类组成与显微镜观察结果具有较好的一致性.结果说明DGGE技术可作为一种辅助方法对赤潮藻类进行分类鉴定.     

利用16S-23S rDNA间隔区快速鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种

利用16S-23S rDNA间隔区(ISR)长度和序列的多态性,结合16S rDNA和23S rDNA的保守性,分别在16S rDNA末端和23S rDNA前端保守区设计上下游引物,进行PCR扩增.结果为21株猪链球菌均扩增出长度约为1200bp的片段,8株马链球菌兽疫亚种均扩出约1300 bp的片段,其他属菌株和阴性...     

366例疑似乙型肝炎患者HBV-DNA检测与乙肝5项指标结果分析

目的:探讨HBV-DNA与乙肝5项指标检测之间的相关性.方法:采用荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)测定HBV DNA,并同时运用酶联免疫吸附(ELISA)法测定乙肝5项指标分析二者相关性.结果:小三阳组HBV-DNA阳性检出率及拷贝数均低于大三阳组,有显著性差异(P＜0.01),各组比较结果表明,大三阳组患者血清HBV-DNA检出率最高,达91.92%,平均拷贝数为6.83×106拷贝/ml.结论:乙肝5项指标全部阴性及仅HBsAb阳性者仍有HBV-DNA检出阳性病例,因此在检测中应联合应用两种方法进行检测,以提高检出率,避免漏诊,为临床HBV感染、复制及传染性的判断以及指导治疗提供更为可靠的判定依据.     

葡萄总DNA提取方法的比较研究

以葡萄幼叶为材料，分别采用溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)法、高盐低pH法、简易法、高盐沉淀法和改良十二烷基硫酸钠(SDS)法5种方法提取总DNA，通过A260／A280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD对5种方法所得DNA溶液进行定量、定性分析和综合比较。结果显示高盐低pH法、高盐沉淀法综合效果较好，改良SDS法所得DNA纯度最佳。因此，在实际工作中还应根据实验目的选取最适合的方法。     

孕妇巨细胞病毒感染的检测方法学研究

人巨细胞病毒（HCMV）的感染在人群中存在较为普遍，尤其是孕妇感染后极易招致胎儿畸形甚至死亡。本文就近年来发展起来的对孕妇HOWV感染的检测方法作一简要综述。     

聚合酶链反应在动物系统进化研究中的应用

动物系统进化研究是生命科学中的基础理论研究。以前的研究都是以经典学科为基础而进行的。随着分子生物学技术的发展和完善,特别是聚合酶链反应技术的出现,使系统进化的研究深入到分子水平且结论更可靠,迄今已得到广泛应用,为动物系统进化研究开辟了一个新途径。     

Balb/C小鼠金属硫蛋白一1 cDNA的克隆及序列分析

以RNA一步提取法，采用RT-PCR技术成功地将Balb/C小鼠金属硫蛋白-1cDNA基因片段克隆于质粒pUC-19上，并对克隆片段cDNA进行核苷酸序列测定.