PCR-ELISA和PCR-PAGE法检测血液肿瘤细胞株的端粒酶活性

目的：通过端粒酶聚合酶链反应—酶联免疫测定(PCR—ELISA)和聚合酶链反应—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR—PAGE)方法检测血液肿瘤细胞株HL—60、K562、Raji的端粒酶活性，探讨其临床应用价值。方法：PCR—ELISA方法是将端粒重复序列PCR变性产物与地高辛标记且对端粒重复片段特异的探针杂交，杂交产物通过ELISA进行测定。PCR—PAGE法是将端粒重复序列PCR产物直接进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过硝酸银染色测定端粒酶活性。结果：在端粒酶PCR—ELISA方法检测中，PCR在25-35次循环之间，吸光度A值与循环次数呈线性关系，35-45次循环己达到平台期。PCR—ELISA法检测显示HL—60、K562、Raji细胞均表达高水平的端粒酶活性，吸光度A均值分别为2．362、2．336、2．145。对HL—60、K562、Raji细胞的端粒重复序列扩增的PCR产物直接进行PAGE电泳、银染均呈现3条以上间隔6bP的特征性阶梯状条带。结论：对端粒重复序列PCR产物可同时进行ELISA检测和PAGE—银染，两种方法均可用于恶性肿瘤的临床诊断，ELISA法更为灵敏而简单，且可相对定量。     

PCR技术在分子生物学中的应用

PCR方法(Polymerase China Reaction),即聚合酶链式反应,又称体外基因倍增,它在分子生物学中有着广泛的应用。文中主要讨论了PCR技术在辅助构建跳跃及连锁文库(Jumping andLinking Library),染色体走步(Chromosome Walking),基因修饰(Rene Modification),重组PCR(Recombinant PCR),足迹法(Footprinting),进行克隆(Cloning)和亚克隆(Subcloning)诸方面的应用,同时指出了PCR技术存在的不足,尚有待于改进。     

嗜热生命

你能想像你在滚烫的沸水中游泳吗?当然不可能,绝大多数生命都不可能,在这样的温度中构成我们生命躯体的细胞很快就会分崩离析而不复存在,但是大自然的魅力之一就是往往有超越人们想像的奇迹存在,就在我们的地球上,就在我们的身边,一些生命却在那些我们认为是地狱的高温环境中愉快地生活着,这里是它们生息繁衍的天堂,离开这个天堂迎接它们的将是死亡,它们就是越来越引起人类关注的嗜热生命.     

聚ADP核糖基聚合酶的抑制剂苯甲酰胺在肺癌细胞PG凋亡中的作用

研究了聚ADP核糖基聚合酶（PARP）抑制剂苯甲酰胺（BA）在DNA损伤所造成的肺癌细胞（PG）凋亡过程中的作用,分别用MNNG（N－甲基－N－亚硝基氮亚硝基胍）和BA,以及同时用MNNG和BA处理PG细胞,然后用非放射性细胞增殖测定试剂盒和流式细胞仪测定PG细胞的增殖活性和细胞凋亡的变化,并用免疫组化法检测细胞中Bcl-2蛋白表达的变化,结果表明,在MNNG的作用下细胞的增殖活性受到明显抑制,细胞凋亡显著,Bcl-2蛋白低表达,单独用BA处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达与空白对照组相似,用BA和MNNG共同处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达,与对照细胞和BA单独处理的细胞相比均无明显差异,这说明PARP对诱导细胞凋亡起重要作用,而且这种作用可被PARP抑制剂BA所抑制。     

江苏地区汉族人群六个短串联重复基因座的群体遗传学研究

采用复合扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳分型和银染显示的方法,对江苏地区汉族人群中111个无关个体的6个短串联联重复（STR）基因座（CSF1,TPOX,TH01,D16S539,D7S820和D13S317）进行了群体遗传学研究。经X^1检验。6个基因座的基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡定律（P＞0．05）。它们的联合个体识别率（DP）值＞0．9999;联合非父排除率（PE）值＞0．9882。这6个基因座在江苏地区汉族人群中显示了高度的多态性和良好的鉴别能力,在法医学个人识别及亲子鉴定中有很高的应用价值。     

普通野生稻中NBS同源序列的克隆和分析

已知的植物抗病基因大多数具有核苷结合位点（NBS）和富含亮氨酸重复（LRR）。根据NBS的保守区设计引物,应用聚合酶链式反应（PCR）,从普通野生稻基因组中克隆了4个不同的NBS同源序列（OSNBA1－OSNBA4）。同源性比较显示它们均与非TIR类的NBS序列相似,其中,OSNBA1与双子叶植物拟南芥的RPS2基因更接近;OSNBA2－OSNBA4与单子叶植物水稻的XA1、RPR1基因更相似。     

单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ半巢式PCR检测方法的建立和在病毒性脑炎诊断中的应用

为进一步提高 PCR诊断方法的特异性和敏感性 ,在单纯疱疹病毒 ( HSV) TK基因区设计了一对外层公用引物和两个内层分型引物 ,建立了半巢式 PCR检测和分型 HSV的方法。用该方法检测了天津地区 64例病毒性脑炎患者 (病脑组 )和 4 6例其他中枢神经系统疾病患者 (对照组 )的脑脊液 ( CSF)标本。病脑组了阳性率为 1 5.63% ( 1 0 / 64) ,其中 9例为 HSV-1感染 ,1例为 HSV-2感染。对照组阳性率为 2 .1 7% ( 1 / 46)。本方法在发病后第 1天即可测出 CSF中的 HSV DNA,敏感性为 0 .0 1 TCID50 。     

蓖麻毒素气源感染小鼠后炎性因子的定量分析

蓖麻毒素会引起机体内蛋白合成终止和细胞凋亡,通过测定组织器官内细胞因子的表达情况可监测机体中毒后免疫应答反应的发生与发展。本试验以气溶胶的方式将蓖麻毒素感染给小鼠,采用荧光定量聚合酶链式反应对攻毒后小鼠的肺脏、脾脏及胸腺中的6种炎性因子进行定量分析。研究结果显示:与对照组(生理盐水组)相比,试验组(蓖麻毒素组)小鼠肺脏、脾脏、胸腺中的趋化因子(CCL2、CXCL2)、白介素2(IL-2)和γ干扰素(INF-γ)的信使RNA(mRNA)表达均显著升高;而白介素1(IL-1)的信使RNA(mRNA)在肺脏、脾脏中高表达,在胸腺中为低表达;白介素4(IL-4)的信使RNA(mRNA)在肺脏、胸腺中高表达,在脾脏中为低表达。由此可知:经毒素气源感染后的小鼠,肺组织及免疫器官组织炎性因子分泌水平发生显著改变,局部及整体免疫调节机能紊乱。     

酶的研究与生命科学(三):分子生物学酶的发现和应用

20世纪下半叶,分子生物学取得迅猛发展,分子生物学酶的发现和应用在其中发挥了巨大的推动作用。DNA聚合酶、RNA聚合酶、逆转录酶、限制性内切酶和端粒酶等的鉴定和功能阐明拓展了对许多生命现象的理解和认识。这些酶的应用还衍生出重组DNA、桑格酶法测序和聚合酶链式反应等技术,在基因操作、DNA测序和扩增等方面具有广泛应用。通过介绍分子生物学酶的研究历程展现了酶的发现和应用对当代生命科学研究仍有重要意义。     

HIV相关性口腔白色念珠菌rDNA基因型研究

目的:了解HIV感染人群和健康人群口腔白色念珠菌基因型的分布情况。方法:运用CA-INT特异性引物聚合酶链反应方法扩增白色念珠菌包含1类内含子的编码rRNA的25S rDNA区,根据扩增条带大小进行基因分型,并应用χ2检验对54株HIV感染人群和54株健康人群口腔白色念珠菌基因型别进行分析。结果:CA-INT特异性引物PCR法可将108株口腔白色念珠菌分为A、B和C型,以A型最多见,两组人群口腔白色念珠菌基因型分布基本相同,但HIV感染人群口腔白色念珠菌A型所占构成比高于健康人群,差别有统计学意义。结论:HIV感染人群和健康人群口腔白色念珠菌均具有基因多态性,CA-INT特异性引物PCR法是较好的口腔白色念珠菌种内菌株间鉴定的方法。