芜菁花叶病毒四川分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析

从四川省3个蔬菜基地感病的甘蓝、花菜、萝卜、叶芥菜分离到芜菁花叶病毒6个分离物.利用 RT-PCR克隆了这6个分离物的外壳蛋白基因(CP), 测定了它们的核苷酸序列并进行了序列分析. 结果表明,6个分离物的 CP基因均为864个碱基,核苷酸序列同源性较高, 达 97.0%～100%;它们与 world-B组分离物的同源性最高,达 92.1%～100%;与 basal-B组分离物的同源性最低,仅 87.6%～90.2%. 基于 TuMV的 CP基因核苷酸序列的分子进化树显示,TuMV分离物可分为4组,本研究所分离到的6个 TuMV四川分离物属于第四组,即 world-B组.     

DNA聚合酶Ⅲ全酶的功能和结构的发现

介绍了DNA聚合酶Ⅲ和聚合酶Ⅲ*的发现,DNA聚合酶Ⅲ全酶形式的提出以及全酶亚基的分离。同时,介绍了DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能,其中包括α核心的聚合酶功能,ε亚基的3′→5′外切核酸酶活性,[WTHZ]β[WTH1]亚基滑动夹子的功能以及γ复合物的结构与功能。     

酶促DNA合成研究的进展

笔者介绍了酶促DNA合成研究的进展。科恩伯格和他的同事经历了从合成核苷酸、核苷三磷酸到合成DNA的历程。他们分离并提纯了DNA聚合酶,弄清了合成DNA的最直接的前体,揭示了DNA合成的化学机理,合成了具有感染性的噬菌体ΦX174DNA。     

雌激素受体α检测方法研究进展

综述了雌激素受体α的检测方法及其研究进展,详细介绍了免疫组织化学、逆转录-聚合酶链反应、蛋白质免疫印迹、微流控芯片等方法的研究现状,并做出了展望．     

RT—PCR检测草鱼呼肠孤病毒的方法研究

草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus,GCRV）为草鱼出血病的病原．本实验根据GenBank中GCRV和其他水生呼肠孤病毒毒株的第六基因片段,在其保守区设计了一对GCRV特异性引物,建立了快速检测GCRV的逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）方法．该PCR体系中,上下游引物的最适终浓度为120nmol／L,最适退火温度为52℃．PCR特异性试验表明：所设计的引物只能扩增GCRV的核酸,而不能扩增嗜水气单胞菌BSK-10、WSSV以及正常CIK细胞的DNA或RNA．敏感性试验表明,当GCRV的反转录模板稀释至5-7时,PCR结果还为阳性．用所建立的RT—PCR方法对5份样品进行检测,结果表明本研究建立的RT—PCR检测方法可靠且可行．     

Novel protein detection method based on proximity-dependent polymerase reaction and aptamers

In recent years, specific detection of proteins is one of the hot issues about aptamers in proteomics. Here we reported a simple, sensitive and specific proximity-dependent protein assay with dual DNA aptamers. Thrombin was used as the model protein, and two aptamer probes with complementary sequence at 3′-end were designed for the two distinct epitopes of the protein. Association of the two aptamers with thrombin resulted in stable hybrids due to the proximity of 3′-end, then polymerase reaction was induced. The amount of obtained dsDNA was indicated using the fluorescence dye Sybr Green I. The results showed that the initial velocity of polymerase reaction had a positive correlation with concentration of thrombin. The advantages of this dual-aptamer-based approach included simple and flexible design of aptamer probes, high selectivity and high sensitivity. The detection limit was 6.9 pmol/L.     

正交设计优化山茱萸ISSR-PCR反应体系研究

利用正交试验设计法,从引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2 浓度和dNTP浓度4种因素3个水平,对山茱萸ISSR-PCR反应体系进行优化分析,并在此基础上对模板DNA浓度、PCR反应过程中的退火温度进行梯度检测.结果表明,20 μL ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度分别为:1×PCR buffer、150 μmol/L dNTP、1.0 μmol/L引物、2.5 mmol/L Mg2 和2.0 U TaqDNA聚合酶,最佳模板DNA浓度为20～80 ng,引物UBC835的最佳退火温度为57.2℃.     

犬附红细胞体病PCR检测方法的建立及应用

根据Genbank中已经发表的犬附红细胞体16sRNA基因序列设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增出一条与目的片段大小一致,约630bp的基因片段,建立了PCR快速检测方法．以建立的PCR检测方法及瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法为基础对20例犬附红细胞体病例进行检测,比较四种方法的检出率．结果表明：建立的PCR检测方法的检出率略高于吖啶橙染色,明显高于瑞氏、姬姆萨染色,进而证明建立的PCR检测方法可用于犬附红细胞体的快速诊断和流行病学调查．     

虾夷扇贝体内尼氏单孢子虫检测方法

为了解中国近海贝类受原生动物寄生虫--尼氏单孢子虫(Haplosporidium nelsoni)污染状况,利用显微镜观察、原位杂交方法(ISH)和聚合酶链式反应(PCR)方法对2007年采集于大连大窑湾和长海县养殖区的虾夷扇贝样品进行尼氏单孢子虫检测,并比较了浮筏式和底播式养殖的虾夷扇贝中尼氏单孢子虫的检测结果.结果表明,在2007年2月大窑湾浮筏式养殖的成体虾夷扇贝体内检出尼氏单孢子虫;在2007年5～8月长海县浮筏式养殖的成体扇贝体内普遍检测出尼氏单孢子虫,而在其他月份的成体扇贝体内以及全年浮筏式养殖的扇贝幼苗和底播养殖的扇贝体内未检出尼氏单孢子虫.     

真核细胞转录系统启动T7启动子起始的研究

利用氯霉素乙酰转移酶基因（ＣＡＴ）和人低密度脂蛋白受体基因（ＬＤＬＲ）作为报道基因,根据α－鹅膏蕈碱（α－ａｍａｎｉｔｉｎ）对真核生物ＲＮＡ聚合酶的选择性抑制,分析Ｔ７噬菌体启动了为哺乳类动物细胞启动外源基因表达的机制。结果表明：真核生物ＲＮＡ聚合酶Ⅱ可启动Ｔ７启动子的转录;同时应用ＤＮＡ－蛋白质凝胶泳动技术,发现人工合成的Ｔ７启动子能与核蛋白质结合,进上步证明了哺乳类动物细胞妄动Ｔ７启动子的转录