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121.
滚环DNA扩增(Rolling circle DNA amplification,RCA)是一种等温信号扩增方法,其线性扩增倍数为10^5,指数化扩增能力大于10^9,产生的扩增产物连接在固相支持物(如玻片、微孔板等)表面的DNA引物或抗体上(适宜作生物芯片研究)。RCA是一种适合在芯片上(on-chip)进行信号扩增的新技术,它既能提供研究分析的敏感性和特异性,又能保持立体分析的多元性。RCA亦是一种痕量的分子检测方法,可用于极其微量的生物大分子和生物标志的检测与研究。, 相似文献
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123.
从海南发病的卵形鲳鲹中分离到一株病毒,经测序分析,推测该病毒为神经坏死病毒.提取病鱼脑部、眼部总RNA,并用其反转的cDNA为模板,分段克隆出RNA1和RNA2片段,测序后通过拼接获得其基因组,命名为GPNNV(Golden Pompano Nervous Necrosis Virus).系统进化树分析结果表明,GPNNV属于RGNNV基因型.为了获得GPNNV特异性强、灵敏度高的检测引物,本研究基于GPNNV的RNA2保守区设计了9对检测引物,然后通过普通PCR及实时荧光定量PCR技术,筛选出1对最佳引物,可以检测到病毒含量为10copies·μL-1的样本.采用筛选出的引物,在病鱼组织中进行检测,结果表明该引物可以准确检测出感染病毒性神经坏死病毒的样本,具有较高的实际应用价值.以上结果可为卵形鲳鲹神经坏死病毒病的诊断提供有效的方法,对卵形鲳鲹神经坏死病毒病的预防具有重要意义. 相似文献
124.
125.
126.
目的:通过端粒酶聚合酶链反应—酶联免疫测定(PCR—ELISA)和聚合酶链反应—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR—PAGE)方法检测血液肿瘤细胞株HL—60、K562、Raji的端粒酶活性,探讨其临床应用价值。方法:PCR—ELISA方法是将端粒重复序列PCR变性产物与地高辛标记且对端粒重复片段特异的探针杂交,杂交产物通过ELISA进行测定。PCR—PAGE法是将端粒重复序列PCR产物直接进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,通过硝酸银染色测定端粒酶活性。结果:在端粒酶PCR—ELISA方法检测中,PCR在25-35次循环之间,吸光度A值与循环次数呈线性关系,35-45次循环己达到平台期。PCR—ELISA法检测显示HL—60、K562、Raji细胞均表达高水平的端粒酶活性,吸光度A均值分别为2.362、2.336、2.145。对HL—60、K562、Raji细胞的端粒重复序列扩增的PCR产物直接进行PAGE电泳、银染均呈现3条以上间隔6bP的特征性阶梯状条带。结论:对端粒重复序列PCR产物可同时进行ELISA检测和PAGE—银染,两种方法均可用于恶性肿瘤的临床诊断,ELISA法更为灵敏而简单,且可相对定量。 相似文献
127.
PCR方法(Polymerase China Reaction),即聚合酶链式反应,又称体外基因倍增,它在分子生物学中有着广泛的应用。文中主要讨论了PCR技术在辅助构建跳跃及连锁文库(Jumping andLinking Library),染色体走步(Chromosome Walking),基因修饰(Rene Modification),重组PCR(Recombinant PCR),足迹法(Footprinting),进行克隆(Cloning)和亚克隆(Subcloning)诸方面的应用,同时指出了PCR技术存在的不足,尚有待于改进。 相似文献
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129.
研究了聚ADP核糖基聚合酶(PARP)抑制剂苯甲酰胺(BA)在DNA损伤所造成的肺癌细胞(PG)凋亡过程中的作用,分别用MNNG(N-甲基-N-亚硝基氮亚硝基胍)和BA,以及同时用MNNG和BA处理PG细胞,然后用非放射性细胞增殖测定试剂盒和流式细胞仪测定PG细胞的增殖活性和细胞凋亡的变化,并用免疫组化法检测细胞中Bcl-2蛋白表达的变化,结果表明,在MNNG的作用下细胞的增殖活性受到明显抑制,细胞凋亡显著,Bcl-2蛋白低表达,单独用BA处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达与空白对照组相似,用BA和MNNG共同处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达,与对照细胞和BA单独处理的细胞相比均无明显差异,这说明PARP对诱导细胞凋亡起重要作用,而且这种作用可被PARP抑制剂BA所抑制。 相似文献
130.