全文获取类型
收费全文 | 4209篇 |
免费 | 149篇 |
国内免费 | 378篇 |
专业分类
系统科学 | 19篇 |
丛书文集 | 124篇 |
教育与普及 | 605篇 |
理论与方法论 | 47篇 |
现状及发展 | 25篇 |
综合类 | 3916篇 |
出版年
2024年 | 14篇 |
2023年 | 62篇 |
2022年 | 94篇 |
2021年 | 114篇 |
2020年 | 74篇 |
2019年 | 104篇 |
2018年 | 45篇 |
2017年 | 67篇 |
2016年 | 75篇 |
2015年 | 104篇 |
2014年 | 241篇 |
2013年 | 174篇 |
2012年 | 189篇 |
2011年 | 218篇 |
2010年 | 197篇 |
2009年 | 283篇 |
2008年 | 263篇 |
2007年 | 228篇 |
2006年 | 193篇 |
2005年 | 222篇 |
2004年 | 211篇 |
2003年 | 200篇 |
2002年 | 174篇 |
2001年 | 163篇 |
2000年 | 157篇 |
1999年 | 155篇 |
1998年 | 114篇 |
1997年 | 88篇 |
1996年 | 64篇 |
1995年 | 64篇 |
1994年 | 92篇 |
1993年 | 73篇 |
1992年 | 74篇 |
1991年 | 48篇 |
1990年 | 38篇 |
1989年 | 38篇 |
1988年 | 12篇 |
1987年 | 7篇 |
1986年 | 2篇 |
1944年 | 1篇 |
排序方式: 共有4736条查询结果,搜索用时 453 毫秒
141.
将小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)与经TCS免疫过的小鼠脾细胞融合,融合后的细胞悬浮于HAT培养液中进行选择性培养,挑选可以分泌TCS单克隆抗体的细胞系,再经克隆化为单克隆细胞系。用间接酶联免疫吸附法检测此细胞系分泌单克隆抗体情况。经细胞融合和2次克隆化后,获得1株可以稳定分泌TCS单克隆抗体杂交瘤细胞系,ELISA检测结果为阳性。获得了可以稳定分泌天花粉蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为TCS鉴定、应用奠定良好的基础。 相似文献
142.
143.
天花粉蛋白抗单纯疱疹病毒1型的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
检测用基因工程方法制备的天花粉蛋白抗单纯疱疹病毒1型的活性。将单纯疱疹病毒1型在细胞系中培养.加入天花粉蛋白后,观察细胞病变情况,用酶联免疫吸附(ELISA)的方法检测病毒生长情况。结果显示,加入天花粉蛋白的细胞始终未见细胞病变,ELISA检测为阴性;阴性对照组细胞在第3d以后均出现单纯疱疹病毒1型感染典型细胞病变.ELISA检测结果为阳性;阳性对照组始终未见单纯疱疹病毒1型感染典型细胞病变,ELISA检测结果为阴性。天花粉蛋白在体外培养细胞系中可以抑制单纯疱疹病毒1型。 相似文献
144.
分别提取手术切除人原发性HCC肝癌和癌旁肝组织总RNA并逆转录为cDNA,在hNTKL-BP1基因的高保守区设计相应引物和Taqman荧光探针,实时检测PCR产物的荧光强度,采用2-△△Ct方法分析比较该基因在人类肝癌组织和癌旁肝组织中的表达差异.结果是44例原发性HCC肝癌组织中hNTKL-BP1基因表达水平显著高于癌旁肝组织(t=2.69,P<0.01),肝癌组织与癌旁肝组织hNTKL-BP1基因表达差异和肿瘤大小有一定的相关性(P=0.028),hNTKL-BP1基因可能与肝癌的发生、发展有一定相关性. 相似文献
145.
CtBP2(E1AC-terminal binding protein 2)作为辅阻遏物与多种转录因子联系而参与到很多生物过程中,如细胞分化、凋亡、发育和肿瘤发生等,然而其中许多作用机制尚不明了.为了对CtBP2进行深入研究,利用高通量酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵,与含有1000个人肝基因克隆的酵母双杂交文库进行接合筛选获得了一个与它相互作用的猎物蛋白CCNH(Cyclin H).通过GST-pull down、免疫共沉淀和亚细胞共定位等实验进一步证明了这两个蛋白在体外和体内的相互作用. 相似文献
146.
利用GPS-LS接点扫描系统, 在荧光假单胞菌G2的5-磷酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶编码基因aroA中随机插入15 bp (即编码5个氨基酸短肽)的外源片段, 建立含一系列不同插入位点的aroA突变体库. 利用内源aroA基因缺失的大肠杆菌突变株ER2799对突变体库进行功能互补筛选, 测序后确定了12个可以忍受5个氨基酸插入的位点, 其中位点F295/T296经Ssp DnaE内含肽(intein)介导的蛋白互补技术鉴定为可拆分和蛋白重建的位点. 从位点F295/T296将G2-EPSPS基因一分而二, N-端和C-端片段分别连接在携带Ssp DnaE 内含子元件的原核表达双质粒上, 获得共转化质粒pMEPSN295IN和pKEPSC296IC. 将质粒pMEPSN295IN和pKEPSC296IC分别或共转化内源aroA基因缺失的大肠杆菌突变株ER2799中, 携带共转化质粒的重组子能够在M9限制性培养基生长, 而携带单一质粒的不能生长, 表明从位点F295/T296拆分的aroA基因在内含肽介导下实现了蛋白重建, 在突变株ER2799中恢复了5-磷酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶活性, 酶活水平达到野生型的62.92%,为4.48 U/mg. 相似文献
147.
水通道蛋白AQP1的表达促进SMMC-7221人肝癌细胞的迁移 总被引:1,自引:0,他引:1
肿瘤细胞的迁移是肿瘤侵润和转移的关键步骤. 本研究发现水通道蛋白介导的细胞膜高水通透性促进肿瘤细胞迁移. 对高转移性SMMC-7221人肝癌细胞系进行RT-PCR, 免疫荧光和免疫印迹分析, 发现水通道蛋白AQP1表达. 进一步分析发现, SMMC-7221细胞系有细胞膜高水通透性(SMMC- 7221hPf)和低水通透性(SMMC-7221lPf)的两个亚群, 分别与细胞膜AQP1表达量相一致. SMMC- 7221hPf细胞的穿孔迁移速率和平面迁移率均显著高于SMMC-7221lPf, 而细胞的贴附和增殖能力没有显著差别. AQP1腺病毒感染SMMC-7221lPf细胞提高了AQP1表达量以及细胞膜水通透性和细胞迁移速率. 上述结果显示, 水通道蛋白AQP1介导的细胞膜高水通透性促进SMMC-7221人肝癌细胞的迁移, 并且可能参与肿瘤的侵润和转移过程. 相似文献
148.
为检测苏云金杆菌晶体蛋白Cyt1A对Vip3A表达和杀虫活性的影响,将p20和cyt1A基因与vip3A基因连接构建了重组质粒pHVC20,然后电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株CryB中进行了共表达,以单独表达Vip3A蛋白的CryB(pHPT3)作为对照菌株。Westernblot结果显示,Vip3A蛋白在CryB(pHVC20)菌株中的最大表达量约为在CryB(pHPT3)菌株的2倍,这可能是由于前者中的辅助蛋白P20增加了Vip3A表达量的缘故,晶体蛋白Cyt1A的存在对Vip3A的正常表达没有影响。生物测定结果表明,CryB(pHVC20)和CryB(pHPT3)菌株对斜纹夜蛾初孵幼虫的LC50值分别为10.62!g/ml和78!g/ml,前者的毒力比后者提高了6倍,这表明Cyt1A蛋白和Vip3A蛋白对目标昆虫的毒力可能存在着协同增效作用。 相似文献
149.
150.