转基因花卉的DNA提取与多重PCR分析

分别以CTAB法、DNA提取试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊3种花卉的基因组DNA，凝胶电泳结果表明试剂盒提取的效果较好。设计合成了3对引物，分别扩增花椰菜花叶病毒（Cauliflower mosaic virus,CaMV)35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因（nos）终止子、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶Ⅱ(nptⅡ）基因。普通PCR检测结果表明，3种花卉6个样品中仅矮牵牛的1个样品含有这3种转基因成分，酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性。尝试以多重PCR同时检测转基因矮牵牛与对照阳性质粒中的2个或3个转基因成分，得到预期结果。     

人类巨细胞病毒启动子控制的人Ⅸ因子cDNA在人体细胞中的高效表达

凝血因子Ⅸ(简称Ⅸ因子)是人体内凝系统的重要成分之一,它的缺乏或功能缺陷可导致血友病B.在血友病B基因治疗的研究中,如何提高Ⅸ因子蛋白的产量是关键问题之一。在以前的研究中,我们比较了SV40早期启动子、小鼠金属硫基因蛋白启动子和Moloney小鼠白血病病毒LTR启动子的作用。为进一步提高Ⅸ因子基因在培养细胞特别是人     

番茄ACC合成酶基因Le-ACS6启动子的结构分析

乙烯对高等植物的生长发育具有重要的调控作用, 而Le-ACS6是控制番茄果实发育过程中第1系统乙烯合成的关键酶, 其基因表达受乙烯的负反馈调节. 利用5′系列缺失的Le-ACS6启动子与报告基因LUC的融合基因以微粒轰击法瞬时转化番茄果实, 发现Le-ACS6启动子中ATG上游-347 ~ -266区域可能含有与响应乙烯负调控相关的顺式作用元件. 分别以全长和缺失-347 ~ -266区域的Le-ACS6启动子与报告基因GUS构建融合基因, 利用农杆菌介导的方法稳定转化微型番茄Micro-Tom. 结果表明, -347 ~ -266区域缺失的Le-ACS6启动子所驱动的GUS表达不再受外源乙烯的抑制.     

水稻16kDa醇溶蛋白启动子克隆及载体构建

水稻种子16 kDa醇溶蛋白是水稻种子成熟过程中,由16 kDa基因编码,16 kDa醇溶蛋白启动子调控,在胚乳中特异表达的蛋白质.以水稻基因组DNA为模板,通过PCR扩增技术得到16 kDa启动子片段,序列分析结果表明:获得的启动子片段的大小为931 bp,与已报道的该启动子序列相比较,其核苷酸序列同源性为99.9%.该启动子区域含有TATA-box,CAAT-box,GCN4基序,Prolamin-box等胚乳特异表达启动子所必需的正调控元件.利用该启动子构建了植物种子特异表达载体pC16 kDP.     

光学免疫传感器中芯片的制备

为满足光学免疫传感器在环境监测和食品卫生检测领域中应用的要求,研究了一种免疫芯片制备方法,并用平面波导型荧光免疫传感器对免疫芯片的性能进行了评价。该方法可以将小分子物质固定到玻璃基底上。试验结果表明:该芯片能够有效抑制蛋白质的非特异性吸附,并对目标物质抗体的响应符合Logistic方程;修饰基片的氨基葡聚糖的相对分子质量和氨基摩尔比都影响免疫芯片对抗体响应灵敏度;平行测定20次的信号标准偏差小于5%,测定后芯片性能没有明显下降。     

禽流感病毒H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的研究

 在获得禽流感病毒多克隆抗体及H5亚型特异性单克隆抗体的基础上,研究建立H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5亚型禽流感病毒.优化反应条件,确定包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与RT-PCR方法比较.同时使用该方法对野外样品进行检测.结果表明:该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H5亚型禽流感病毒.     

抗人脂肪酸结合蛋白的单克隆抗体的制备

Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ (ＦＡＢＰｓ)ａｒｅｎｏｎ ｅｎｚｙｍａｔｉｃｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｌｏｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ ( 1 4～ 1 5ｋＤ)ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｆｏｕｎｄｉｎａｗｉｄｅｖａｒｉｅｔｙｏｆｍａｍｍａｌｉａｎｔｉｓｓｕｅｓ[1] .Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ,ｔｈｅＦＡＢＰｆａｍｉｌｙｉｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆａｔｌｅａｓｔｎｉｎｅｄｉｓｔｉｎｃｔｔｙｐｅｓｏｆＦＡＢＰ ,ｅａｃｈｔｙｐｅｓｈｏｗｉｎｇａｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｐａｔｔｅｒｎｏｆｔｉ…     

盐地碱蓬幼苗水提取物对小鼠非特异性免疫功能 …

通过小鼠刚果红吞噬试验，初步研究了盐地碱蓬幼苗水提取物地小鼠非特异性免疫功能的影响。在采用相同剂量、不同时间间隔和不同给药次数的试验方法下，将盐地碱蓬幼苗水提取物Ａ，Ｂ，Ｃ分别灌胃给药，结果表明：水提取物Ａ和Ｃ具有显著增强机体非特异性免疫的功能，其中以Ｃ（间隔１２ｈ给药，共给药４次）的效果最为显著，而Ｂ的效果不明确。初步揭示了盐地碱蓬幼苗水提取物的一些药效学和药物代谢动力学特点。     

酿酒酵母可诱导启动子功能特性的研究

把大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因克隆到带有ＧＡＬ１启动子的酵母诱导表达质粒ｐＹＥＳ２中，研究了酵母半乳糖诱导启动子ＧＡＬ１控制下的基因表达特性．研究表明，β－半乳糖苷酶基因的表达明显地受培养基中碳源的调节，产生的β－半乳糖苷酶可达细胞总蛋白含量的１０％左右，从而为利用可调控表达系统在酵母菌中实现外源基因较高水平表达打下了一定基础．     

多能硫杆菌RubisCO基因的亚克隆及各种启动子对其表达的影响

将多能硫杆菌ＲｕｂｉｓＣＯ基因从两个方向亚克隆到ｐＢＲ３２２和ｐＫＫ２２３－３载体上，通过酶切的方法对各种质粒的插入方向进行了确证。并进一步对这两种插入方向的质粒在大肠杆菌中的表达情况进行了酶活性的测定，该基因片段在ｐＫＫ２２３－３载体的ｔａｃ启动子的启动下，表达活性比ｌａｃ妄动子以及ｐＢＲ３２２载体上的Ｐ１和Ｐ２启动子高。