聚苯乙烯为致孔剂的分子印迹膜对溶菌酶吸附性能的研究

探索聚苯乙烯微球的添加对于分子印迹膜对溶菌酶(Lysozyme, Lyz)吸附性能的影响.以溶菌酶为模板分子,丙烯酰胺、N,N'-亚甲基双丙烯酰胺为功能单体、聚苯乙烯(Polystyrene,PS)微球为致孔剂,制备聚苯乙烯为致孔剂的分子印迹聚合物膜(PS-MIP).PS-MIP的吸附平衡时间为30 min,短于未添加聚苯乙烯微球的分子印迹聚合物膜(MIP);PS-MIP与MIP对于Lyz的吸附能力均明显好于聚苯乙烯为致孔剂的非分子印迹聚合物膜(PS-NIP)与未添加聚苯乙烯微球的非分子印迹聚合物膜(NIP);PS-MIP对Lyz的选择性要好于MIP,而卵清蛋白和牛血清白蛋白在PS-MIP和MIP上的荧光信号没有差别.实验结果表明,在分子印迹膜聚合过程中添加聚苯乙烯微球,有利于缩短吸附时间,增大溶菌酶的吸附量并提升选择性.     

铜(Ⅱ)促进溶菌酶的选择性水解切割反应

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,研究了中性条件下CuC l2与鸡蛋清溶菌酶的选择性水解切割反应。研究结果表明,在近中性条件下,CuC l2可以高效且有选择地切割溶菌酶。提高CuC l2对溶菌酶的摩尔比、温度和增加恒温时间均可显著增加切割效率,但过高的温度和配比反而会降低切割的选择性。Cu2+对溶菌酶的切割没有缓冲效应,而且Cu2+对溶菌酶的选择性切割位点与溶菌酶的二级结构有关。     

牙鲆IDH-1基因型与溶菌酶活性的相关性研究

采用同工酶水平切片淀粉凝胶电泳及4种组织器官(肝脏、头肾、脾脏、中肾)及黏液溶茵酶琼脂板扩散活性测定法,分析了人工养殖牙鲆IDH-1(IDH基因座位1)基因型与溶菌酶活性的关系.研究表明,牙鲆体表黏液的溶菌酶活性与IDH-1基因型存在很强的相关性,杂合个体的溶菌酶活性显著高于纯合个体,差异极显著(P<0.05).     

复合溶菌酶对小儿白色念珠菌病的研究

由于当前广谱抗生素的广泛应用和不合理使用，导致机会感染微生物尤其是真菌的感染率呈逐年上升趋势，其中白色念珠菌是主要的机会致病菌之一，并且临床上对白色念珠菌感染所致的小儿口腔疾病、常用抗真菌药物局部治疗有较大的副作用。     

转基因小鼠乳腺表达重组人溶菌酶

人溶菌酶是由130个氨基酸组成的碱性多肽, 具有抗菌、抗病毒和增强免疫力的功能, 对生物体的自身防御起着重要作用. 为研究乳腺生物反应器表达重组人溶菌酶和提高牛奶的免疫活性, 制备了以溶菌酶基因组序列为目标基因的表达载体的转基因小鼠模型. 经转基因小鼠的制备, 通过PCR和Southern blot 检测, 从83只出生小鼠中获得6只整合人溶菌酶融合基因的转基因小鼠. 对F1代小鼠的PCR检测表明外源基因可以遗传给后代. 在3只转基因阳性母鼠的乳汁中, 用Western blot方法可以检测到重组人溶菌酶的存在, 最高表达量达到0.2 mg/mL. 经活性检测, 转基因小鼠乳清的溶菌酶活性显著提高, 已达到人乳清溶菌酶活性的0.4倍, 而非转基因小鼠乳清具有极低的溶菌酶活性. 尽管转基因小鼠乳清中重组人溶菌酶活性还低于人乳清中溶菌酶活性, 但是转基因小鼠乳汁中的重组人溶菌酶与人溶菌酶具有相同的比活力. 为乳腺生物反应器表达重组人溶菌酶的研究和开发应用打下了坚实的基础.     

反胶团法提取溶菌酶的研究

本文对AOT/异辛烷反胶团用于从鸡蛋清中萃取溶菌酶进行了研究.对商品AOT、精制AOT和重复使用的AOT加以比较后发现未经提纯处理的商品AOT对萃取虽有影响,但仍具实用性.AOT/异辛烷反胶团系统能有效地保护溶菌酶的活性.此外,对AOT浓度、水相pH值、离子强度等对萃取过程的影响也作了讨论.     

粘虫血淋巴溶菌酶的纯化及其对染病小白鼠的初试

给粘虫注射大肠杆菌，血淋巴中溶菌酶活性增强，然后用琼脂糖（ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅ）离子交换层析法纯化溶菌酶。小白鼠先注射致病的阴沟肠杆菌，一小时后腹腔注射从粘虫免疫血淋巴纯化的溶菌酶，结果处理小白鼠死亡率比对照组低，说明试虫血淋巴中的溶菌酶在小白鼠体内可能有一定的抗菌作用。