Production of human lysozyme-transgenic cloned porcine embryos by somatic nuclear transfer

Due to their physiology and organ size, pigs have significant potential as human disease models and as organ transplantation donors. Genetic modification of pigs could provide benefits for both agriculture and human medicine. In this study, five fetal pig fibroblast cell lines from two species (Wuzhishan and Landrace pigs) were transfected using double-marked human lysozyme (HLY) plasmids (pBC1-HLY-GFP-NEO) by a liposome-mediated method. The ratio of green fluorescent protein (GFP)-expressing cells was >95% in sw7, sw8, slw3 and slw6 cell lines, but only 49.3% in slw9 cells. Cells from the four highly transgenic lines were used as nuclear donors to construct embryos, which were then cultured after fusion and activation by electric stimulation. The rate of cleavage was 76.7%, 48 h after activation. After 7 days, 18.5% of cleaved eggs had developed to the blastocyst stage and 93.3% of blastocysts were GFP-positive. These results indicate that transgenic fetal pig fibroblast cell lines could be obtained by a liposome-mediated method, though the transfection efficiency varied between cell lines. Reconstructed embryos derived from transgenic cells could successfully develop into blastocysts, most of which were GFP-positive.     

基于硅胶载体表面分子印迹聚合物对牛血清蛋白识别性能

以硅胶作为载体,丙烯酰胺和2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸为双功能单体,牛血清蛋白质作为模板分子,制备了牛血清蛋白表面分子印迹聚合物,并对其制备方法、性状和性质进行了检测。结果证明制备的分子印迹聚合物大小在400 nm左右,当功能单体的配比为5∶1时为最优配比,分子印迹聚合物对牛血清蛋白质的结合在60 min时达到平衡,并且在浓度为0. 6mg·m L~(-1)的情况下,结合率达到饱和。特异性检测可知分子印迹聚合物对牛血清蛋白的结合率最高并且其印迹因子(IF)高达1. 58,说明了它对目标蛋白具有良好的选择识别能力,且重复性能好,重复检测后吸附量在80%左右。     

从七肽噬菌体展示库中筛选蛋白质配基

为了研究噬菌体展示技术的应用，以溶菌酶为靶分子从七肽噬菌体展示库中筛选蛋白质的高亲和力噬菌体配体，所筛选的亲和力最高的噬菌体的ELISA检测值A405nm可达0．634．通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列，认为基元HWWW是肽段与酶分子发生亲和的必需序列．此外，由于靶分子和高亲和性展示肽的等电点分别为11．2和6．74，因此在亲和环境中携带异种电荷，利于亲和吸附的发生，而此时低亲和性展示肽与靶分子携带同种电荷，阻碍了亲和吸附．同时，高亲和性肽段HWWPAS和与其有较高同源性的肽段HWTWWNL都有适中的疏水性，这有利于肽与靶分子表面的疏水位点相互作用从而产生亲和吸附．     

尿素、盐酸胍在溶菌酶分子上结合数的平衡渗析研究

蛋白质的活性及生物功能与其二级、三级和四级结构有重要联系,而这些结构主要是以氢键、疏水键等弱相互作用所维系.由于这些弱相互作用易受外界因素的影响,使蛋白质分子发生构象变化,从原来的折叠态变为去折叠态.这一变化使得蛋白质分子失去生物功能,称为蛋白质的变性.能够使蛋白质变性的化学物质被称为变性剂,尿素和盐酸胍是常见的蛋白质变性剂.     

人溶菌酶的双水相萃取法分离

采用双水相体系直接从重组巴氏毕赤酵母发酵上清液中分离人溶菌酶,研究了体系中聚乙二醇(PEG)平均分子量,PEG、硫酸钠和氯化钠浓度,pH对人溶菌酶和总蛋白的分配系数、相体积比、萃取率和纯化因子的影响。结果表明:在PEG 4000、N a2SO4和N aC l质量分数分别为0.08、0.13、0.06,pH为5.6时,在室温下的双水相萃取率达96.63%,纯化因子为6.5。     

溶菌酶口含片活力测定影响因素

通过对检测方法进行改进,将片剂供试品溶液制备中的水改为缓冲液,可使回收率显著提高,并可排除不同辅料对结果的影响。对检测过程中的影响因素进行了考察,实验发现,由于原料与片剂的供试品溶液制备方法不同,尤其是片剂的水溶步骤,是导致活力偏低的主要原因。     

珍禽蛋溶菌酶制备工艺优化及稳定性研究

溶菌酶广泛存在于动、植物及微生物中,以鸡蛋蛋清中含量最高.珍禽蛋蛋清中溶菌酶酶活力远高于普通鸡蛋中溶菌酶酶活力,更适宜作为优质溶菌酶生产来源.文中以珍禽蛋与阳离子交换树脂为原料,建立一条适合工业化生产的珍禽蛋溶菌酶的制备工艺,研究主要分为以下几个方面：溶菌酶提取原料及树脂型号的选用,高原乌鸡鸡蛋溶菌酶制备工艺的建立,高原乌鸡鸡蛋溶菌酶质量评价.     

高盐条件下溶菌酶在疏水表面的折叠吸附

采用摇床法测定不同硫酸铵浓度时天然溶菌酶（Lys）在疏水作用色谱填料PEG-600上的吸附等温线,运用计量置换理论（SDT）计算出不同盐浓度条件下蛋白在吸附过程中的吸附自由能.得出在高盐浓度时（大于1.5mol/L）,总的置换吸附自由能为负值,推断出吸附是自发进行的,且可以定量计算出蛋白与PEG-600之间的吸附亲和能与水分子的解吸能.结合与吸附等温线相同条件下焓变测量数据表明,随盐浓度增大熵值增加,是因为去水合作用导致的熵增大为吸附提供了驱动力的缘故.其结果可以很好地解释液/固界面上折叠吸附的规律.