棉花[AG]复合染色体组异源四倍体的人工合成

棉籽不仅产纤维和食用油,棉仁中富含蛋白质高达45—50%,是极有开发价值的高蛋白食品和饲料资源.但棉仁中因含有毒的棉酚(棉毒素)而难以利用.因此,选育低酚棉或选育种子无棉酚(无腺体)而植株含棉酚(有腺体)的棉花,日益受到国内外棉花育种学家的重视.原产大洋洲的野生二倍体比克氏棉(Gossypium bickii)具有种子油腺延缓形成的特性,即种子不具腺体,不含棉酚,待种子萌发后才形成腺体,产生棉酚.自1980年始,我们以栽培的     

苏铁树叶细胞质55rRNA的一级结构分析

用热酚法抽提苏铁(Cycas revoluta)树叶细胞质的总RNA,经10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离得到5S rRNA。用核糖核酸酶和化学降解凝胶直读法测定出5S rRNA 的一级结构由121个核苷酸组成,且3′一端有连续三个尿苷酸。并具有真核生物5S rRNA的一般结构特征。按真核生物5S rRNA的二级结构模型,构建了苏铁树叶细胞质5S rRNA的二级结构。     

异源双链DNA体外错配修复功能分析模型的构建

DNA错配修复(mismatch repair, MMR)功能缺失是确认的肿瘤发病机制之一. 随着研究的深入以及临床诊断治疗的要求, 有必要从整体上对肿瘤的错配修复功能状态作出评价. 以M13mp2噬菌体及其衍生株和E. coli大肠杆菌为材料, 以lacZα为报告基因, 构建含有错配碱基的异源双链DNA分子. 提取错配修复功能完整细胞株(TK6)和错配修复功能缺陷细胞株(Lovo)的全细胞蛋白, 经大T抗原依赖性SV-40 DNA复制检测, 证实其生物学功能保持完整后与构建成功的异源双链DNA分子共同作用, 发现TK6对双碱基缺失del(2)的修复效率超过60%, 对单碱基错配G·G的修复效率超过50%; 而Lovo对双碱基缺失del(2)的修复效率低于20%, 对单碱基错配G·G的修复效率低于10%. 以异源双链DNA为待修复模板, 以细胞株TK6和Lovo分别作为MMR功能完善和缺陷表型的参照, 建立体外错配修复功能分析模型. 应用该模型检测1例具有微卫星不稳定性表型的HNPCC病人肿瘤组织, 发现其MMR功能丧失; 而检测1例微卫星稳定的散发性直肠癌病人肿瘤组织, 发现其具有MMR功能. 结果表明该模型可用于体外检测各种肿瘤细胞和/或组织的错配修复功能. 为肿瘤发病机制的研究提供了可靠的方法, 对进一步了解错配修复功能状态在各种类型肿瘤中的作用有非常重要的意义.     

克隆技术将变得简便易行

人工克隆是一种复制遗传学上特征相同动物的新方法,它不仅较现行方法耗资低廉和简便易行,而且效率和效果更好。 人工克隆技术能够使克隆技术加速进入农业及养殖业,目的在于复制最优良产奶和产肉动物品种。南非自然资源保护学家不久将利用该技术克隆濒危物种。这项技术是由丹麦农业科学研究所加伯尔·瓦耶特(Gabor Vajta)和澳大利亚创新奶产品合作研究中心项目负责人伊恩·刘易斯(Ian Lewis)联合开发的。 美国威斯康星州克隆牛公司Infigen前总裁迈克尔·毕晓普(Michael Bishop)说:“这是朝克隆全过程自动化迈进的重大步骤。”     

α-微管蛋白与玉米细胞质雄性不育的相关性研究

采用两个核背景（Mo17,77)的同核异质、同质异核细胞质雄性不育系及正常品系为材料，以合成的α-微管蛋白基因片段为探针，对玉米细胞质雄性不系转育前后的mRNA进行Northern杂交分析，首次直接从转录水平上了玉米细胞质雄性不育系在败育前后α－微管蛋白基因转录量的差异。结果表明，玉米细胞质雄性不育系α－微管蛋白基因在败育前后的转录量存在着明显的差异，败育前的相对转录量大于败育后的相对转录量，证明了α－微管蛋白基因在花粉发育中起着重要作用，与玉米细胞质雄性不育性密切相关。     

红莲型细胞质雄性不育线粒体相关嵌合基因的发现

以水稻红莲型（HL）粤泰细胞质雄性不育系A和保持系B及杂种一代F1为研究材料，以在DNA和RNA水平均存在差异的atp6基因为探针，筛选A和B的线粒体基因组文库，找到了与红莲型细胞质雄性不育相关的嵌合基因orfH79。该基因位于atp6基因的下游，由coxI的部分编码序列以及一段未知来源的序列构成。PCR和Southern分析均证实了orfh79不育胞质线粒体的特异性。     

胞内共生菌Wolbachia内噬菌体相关尾蛋白基因的分子克隆及特征分析

Wolbachia是一种广泛存在于各种节肢动物体内经母系细胞质遗传的胞内共生菌。它能够改变宿主的生殖和发育行为，引起细胞质不亲和（cytoplasmic incompatibility,CI)、孤雌生殖、雌性化和雄性致死等现象，但是其间的分子生物学机理迄今尚不清楚。采用RDA（representational difference analysis,代表性差异分析）和LM－PCR（ligation-mediated PCR)等方法，通过研究Wolbachia不同品系基因组之间的差异，从来自果蝇Drosophila melanogaster CantonS的Wolbachia(wMelCS)中克隆到了噬菌体相关尾蛋白基因prtp(phage-related tail protein)，同时从果蝇Drosophila melanogaster yw67c23中的Wolbachia(wMel)中克隆到了同源基因。通过研究prtp在不同Wolbachia品系间的表达，发现PrTP可能不直接参与CI过程。体外果蝇S2细胞的瞬时转染实验结果证明了prtp基因内双向核定位序列（bipartite nuclear localization signal sequence,NLS)的功能，prtp基因的存在为噬菌体介导的基因水平转移（horizontal gene transfer,HGT)提供了直接证据，并提示其在Wolbachia的生殖特性中可能扮演重要的角色。     

分子标记鉴定红莲型细胞质雄性不育杂交水稻组合及其亲本

利用RAPD分子标记对红莲型细胞质雄性不育(HL—CMS)杂交水稻组合及其亲本进行了DNA多态性分析。从124个随机引物中筛选出具有非常明显的多态性，且只能扩增出1～5个片段的4个引物能有效地区分和鉴定红莲型(HL)2个杂交水稻组合(粤泰系列，从广系列)的杂种及其亲本。     

痤疮丙酸杆菌对小鼠抗胸膜肺炎放线杆菌血清7型9型的免疫保护

为明确痤疮丙酸杆菌(PA)对具有抗胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清7型和血清9型的异源免疫保护作用,对小鼠免疫PA分离株S14后,分别用APP血清7型(CCVC-265)和血清9型(CCVC-267)攻毒。结果表明,免疫保护率达60%和70%;而用猪抗PA血清免疫小鼠后以APP血清7型和血清9型攻毒,免疫保护率达100%。血清特异性抗体效价检测显示,PA免疫小鼠后,可诱导小鼠产生特异性的抗APP血清7型和9型的抗体,ELISA方法检测特异性抗体平均效价为1 800和2 800。PA对APP血清7型和9型的感染具有良好的保护作用。     

电压依赖性钙通道 Cav3.1 的 cDNA 在爪蟾卵母细胞中的表达

Cav3.1是一种电压依赖性钙离子通道,cDNA全长7 625 bp.非洲爪蟾卵母细胞有表达外源基因的功能,被用于离子通道异源表达的研究中.pGEM-HE是卵母细胞的高效表达载体,但由于pGEM-HE多克隆位点处的酶切点较少,外源片段常不能直接插入.为了将Cav3.1的cDNA表达于卵母细胞中,首先对pGEM-HE的多克隆位点和β-Globin 3'端下游的切点进行了改造,引入需要的酶切点,删除了妨碍重组和mRNA转录的位点.并将Cav3.1的cDNA克隆到改造后的pGEM-HE载体中.将重组的质粒在爪蟾卵母细胞中表达,记录到了Cav3.1的通道电流,为以后的工作提供了基础.