《生物体中几种元素的鉴定检测》实验的教学改进--以栀子叶中钙与铁的含量测定为例

生物体中几种元素的定性鉴定是基础化学实验中一个非常经典且有趣的实验,该实验既能让学生了解植物或动物体内某些元素如钙、铁、磷的简单鉴定方法,又能激发学生对化学的兴趣。但在实际的实验教学过程中,由于多种原因造成实验现象不太明显。为了让实验现象更加明显且结果更加客观可靠,增加可操作性,以栀子叶为例,通过EDTA配位滴定法检验其中钙与铁的存在并确定其含量,从而让学生掌握几种离子的鉴定方法及EDTA配位滴定法的测定原理。通过对该实验的改进,收到了较好的教学效果。     

以改建的农杆菌Ti质粒转化外源基因于单子叶植物花叶芋的研究

当前,应用改建和“解除了武装”的根瘤农杆菌的Ti质粒作为植物基因工程载体的研究得到了迅速的发展,并已建成了若干套植物基因工程的实用载体系统,运用这些系统结合叶圆盘转化法(Leaf-disc transformation)已能将不少外源基因引入双子叶植物细胞并使被转化植物产生了新的性状。但由于根瘤农杆菌宿主范围的限制,使得应用这一载体系统的研究存在着很大的局限性。迄今为止,在单子叶植物中仅有石刁柏、水仙、吊兰、黄独四种植物能够     

Protein tyrosine phosphatase is possibly involved in cellular signal transduction and the regulation of ABA accumulation in response to water deficit in Maize L.coleoptile

Water deficit-induced ABA accumulation is an ideal model or “stimulus-response”system to investigate cellular stress signaling in plant cels,using such a model the cellular stress signaling triggered by water deficit was investigated in Maize L.coleoptile.Water deficit-induced ABA accumulation was sensitively blocked by NaVO3,a potent inhibitor both to plasma membrane H^ -ATPase(PM-H^ -ATPase)and protein tyrosine phosphatase(PTPase).However,while PM-H^ -ATPase activity was unaffected under water deficit and PM-H^ -ATPase activator did not induce an ABA accumulation instead of water deficit,water deficit induced an increase in the protein phosphatase activity,and furthermore,ABA accumulation was inhibited by PAO,a specific inhibitor of PTPase.These results indicate that protein phosphtases may be involved in the cellular signaling in response to water deficit.Further studies identifiled at least four species of protein phosphtase as assayed by using pNPP as substrate,among which one component was especially sensitive to NaVO3.The NaVO3-sensitive enzyme was purified and finally showed a protein band about 66kD on SDS/PAGE.The purified enzyme showed a great activity to some specific PTPase substrates at pH 6.0.In addition to NaVO3,the enzyme was also sensitive to some other PTPase inhibitors such as Zn^2 and MO3^3 ,but not to Ca^2 and Mg^2 ,indicating that it might be a protein tyrosine phosphatase.Interestingly,the purified enzyme could be deactivated by some reducing agent DTT.which was previously proved to be an inhibitor of water deficit-induced ABA accumulation.This result further proved that PTPase might be involved in the cellular signaling of ABA accumulation in response to water deficit.     

激素对油菜子叶再生及转基因瞬间表达的影响

以甘蓝型油菜“湘油15”子叶为外植体,以MS为基本培养基,采用正交试验设计,研究了预培养基2,4-D和6-BA浓度、分化/共培养基NAA和6-BA浓度对子叶芽再生频率和转GUS基因瞬间表达率的影响.结果表明,激素对芽再生频率和转基因瞬间表达率都有重要影响,但激素对芽再生和转基因瞬间表达的影响效应具有不一致性.激素对芽分化的影响程度从大到小依次为再生培养基NAA、预培养基6-BA、预培养基2,4-D、再生培养基6-BA,推导的对于芽再生的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 1.0 mg/L和6-BA1.0 mg/L、再生分化培养基NAA0.2 mg/L和6-BA3.0 mg/L;激素对GUS基因瞬间表达的影响程度从大到小依次为共培养基NAA、共培养基6-BA、预培养基6-BA、预培养基2,4-D,推导的对于瞬间表达的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 0mg/L和6-BA0.2 mg/L,共培养基NAA0.05 mg/L和6-BA3.0 mg/L.推导的对于芽再生频率×GUS基因瞬间表达率的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 1.0 mg/L和6-BA1.0 mg/L,共/分化培养基NAA0.05 mg/L和6-BA3.0 mg/L.     

6-苯甲酰氨基嘌呤和6-呋喃甲酰氨基嘌呤的生物鉴定

6-苯甲酰氨基嘌呤(xj-4)和6-呋喃甲酰氨基嘌呤(xj-5)是中山大学化学系新合成的两种生长调节剂.用萝卜子叶法和与IAA或Ca~(++)协同释放乙烯法测定其生物活性,表明它们均具有细胞分裂素活性,其中xj-4的活性较高,接近6-BA,而xj-5的活性稍低.xj-4的适宜使用浓度是5-10mg/1,xj-5则为10-15mg/1.由于生产成本低,均不失为有效的人工合成细胞分裂素. 细胞分裂素与IAA或Ca~(++)协同释放乙烯是一个快速而准确测定细胞分裂素的方法,其中与IAA的协同作用效果更好.     

高温对蚕豆幼嫩子叶细胞有丝分裂活性和染以体分带的影响

用不同温度对蚕豆子叶进行短时间的非离体处理，结果表明３６℃的高温最适宜子叶细胞的分裂，有丝分裂指数明显高于１６－２２℃时的分裂指数，二者差异非常显著，用经３６℃高温处理的子叶做材料进行染色体制片和分带，染色体分散好，没有细胞质干扰，带纹清晰，首次获得了蚕豆子叶染色体Ｃ－带核型图。     

蓖麻子叶外植体离体再生研究

利用蓖麻子叶作为外植体,建立了一种有效的离体再生体系.从成熟蓖麻种子中剥离的子叶接种在MS基本培养基并添加1.5mg/L 6-BA或10.0mg/L ZT中诱导不定芽的再生的频率最高,分别为64.4%和60.0%.健壮的不定芽在MS+1.5mg/L IBA的培养基中根分化率最高,达46.7%.     

鸡溶菌酶A元件在大豆中对uidA基因瞬时表达的影响

本研究将报告基因uidA(β-葡糖苷酶基因)两侧各含有一个鸡溶菌酶A元件(chiMAR)的中间表达载体pLM9与不含chiMAR的中间表达载体pLM5经农杆菌介导转化大豆,以研究chiMAR对外源uidA基因瞬时表达的影响.结果表明,在大豆品种科丰6号和冀豆12中,chiMAR均能显著提高uidA基因的瞬时表达率(p<0.01),并且chiMAR对不同品种中uidA基因瞬时表达率的影响不同;在科丰6号中,chiMAR对uidA基因的瞬时表达量没有显著影响,但能够降低uidA基因瞬时表达的个体差异度;chiMAR可以显著降低uidA基因在冀豆12中的瞬时表达量(p<0.01),同时提高uidA基因瞬时表达的个体差异度.     

发根农杆菌对苦马豆转化及植株再生的初步研究

用发根农杆菌A4转化苦马豆子叶和下胚轴外植体，获得转化发根．将发根转移到MS无激素培养基上，发根能够持续生长，并于继代40天后自发形成不定芽．将不定芽转移到1／2MS无激素培养基，长出不定根，形成再生植株．再生植株表现出典型的发根综合症，初步判断再生植株为转化植株．