杉木遗传转化受体系统的建立

以杉木试管苗靠近茎尖的茎段为外植体,通过不同预培养时间及不同浓度6-BA、TDZ、头孢霉素、卡那霉素等处理,分析诸因素对茎段再生芽的影响,建立了以杉木茎段为外植体的高频再生系统。结果表明：DCR＋6-BA（1．0mg／L）＋TDZ（0．001mg／L）＋NAA（0．1mg／L）最适干杉木茎段诱导芽发生,预培养时间为2d时,芽诱导频率、平均芽数和芽形成能力最高。切片观察发现,茎段发生的芽多起源干茎段表面,是农杆菌容易抵达的位置,说明茎段附着农杆菌的细胞与再生芽的部位相一致。     

胰升血糖素样肽-1受体激动剂高通量筛选细胞模型研究

为建立GLP-1受体激动剂的高通量筛选方法,将GLP-1受体质粒和报告基因质粒(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC/pGL3)按照1∶5的比例共转染到CHO细胞中,建立GLP-1受体激动剂筛选细胞株。利用GLP-1内源激动剂探索和优化每孔细胞接种密度、荧光素酶表达时间、Bright-GloTM试剂用量、DMSO浓度等筛选条件,建立可靠的筛选方法。当细胞数目为4×104个/孔,激动剂孵育时间为8 h,Bright-GloTM试剂4倍稀释,每孔DMSO终质量分数小于1%时,系统Z′-因子为0.75。利用此模型对中药提取物库进行检测,发现有5个样品显示出活性。结果表明,该模型能够用于GLP-1受体激动剂的高通量筛选。     

鲤鱼(Cyprinus carpio L.) GH受体的分子克隆及其两种转录子的发现

应用反转录-PCR及RACE技术，从二龄鲤鱼肝组织中克隆了生长激素受体(GHR)的全长基因，其开放阅读框编码602个氨基酸，其中包括244个氨基酸的胞外激素结合结构域，24个氨基酸的跨膜区域和334个氨基酸的胞内信号传导区域. 序列分析表明：无论在基因水平还是蛋白质水平，鲤鱼GHR与鲫鱼GHR均具有较高的同源性. 用一对基因特异性引物在研究二龄鲤鱼GHR的组织分布时发现：肝与其他组织的扩增产物大小不一致(肝组织中的约小100bp)，测序结果以及基因组PCR表明这是由于一个97bp的内含子选择性剪切造成的. 而以同样引物在4月龄鲤鱼各组织扩增的片段大小是一致的，且与二龄鲤鱼肝以外组织的扩增产物大小一致. 鲤鱼GHR两种转录子的出现，系转录时发生拼接变化所致，推测是一种与发育有关的机制. 采用半定量RT-PCR方法分析组织相对表达水平，结果显示：GHR在二龄鲤鱼鳃、胸腺、脑组织的表达水平明显低于4月龄鲤鱼.     

编码ATR的胞外区基因cDNA的克隆、测序及表达

目的克隆并在大肠杆菌中表达编码炭疽毒素受体(anthrax toxin receptor,简称ATR)的胞外区基因。方法收集CHO-K1细胞,提取其总RNA,经反转录成单链cDNA,以此为模板PCR扩增出编码ATR胞外区基因,将该基因克隆入载体pUC19中,测序正确后,亚克隆入表达载体pMal-c2x中进行表达。结果利用所设计的引物扩增出完整的编码ATR胞外区基因。以大肠杆菌为宿主在IPTG的诱导下获得表达,激光薄层扫描显示表达蛋白占总蛋白的39%。结论获得了编码ATR胞外区基因cDNA及其原核表达产物,为进一步研究炭疽毒素致病机理和炭疽病的防治奠定了基础。     

苦物质引起去甲肾上腺素预收缩的大鼠主动脉平滑肌舒张的作用机理研究

为研究苦物质舒张预收缩的大鼠胸主动脉平滑肌的作用机制,以测定肌张力为主要手段,结合多种细胞信号通路阻断剂研究了苦物质的作用通路.结果表明:苦物质对于去甲肾上腺素介导的大鼠胸主动脉的收缩具有高效、快速的舒张作用,此舒张作用与IP3受体和L型钙通道的阻断密切相关.故以氯喹和苦精为代表的苦物质因对血管平滑肌具有良好的舒张作用,有望成为针对高血压等血管相关疾病的新的治疗药物.     

雷洛昔芬通过调节端粒酶活性抑制Aβ所致神经细胞凋亡

目的:探讨雷洛昔芬是否具有类似于雌激素对转染了雌激素受体estrogen receptor(ER)α的PC12细胞有保护作用,即对抗淀粉样蛋白AB所致细胞凋亡及活化端粒酶活性.方法:在转染了雌激素受体ERα的PC12细胞(PCER)及转染了对照基因质粒的PC12细胞(PCCON)中分别添加不同的药物.用TUNEL染色法观察细胞凋亡情况;stretch PCR试剂盒分析端粒酶的活性.结果:在经过Aβ处理后的PCER中添加10-8 M雷洛昔芬与10-8雌激素后细胞凋亡数显著减少,而在PCCON中则无明显差异;雌激素和雷洛昔芬对PCER细胞显著促进其端粒酶活性,对PCCON 细胞无此作用.结论:雷洛昔芬与雌激素对有雌激素受体表达的PC12细胞均有活化端粒酶活性,抑制淀粉样蛋白Aβ诱发的细胞凋亡作用,表明雌激素和雷洛昔芬抑制Aβ所致细胞凋亡的作用是通过雌激素受体ER α来实现的.     

3-(4-羟基苄基)-8-甲氧基-1,2,3,4-四氢苯并吡喃[3,4-c]吡啶-5-酮的合成工艺

以3-甲氧基苯酚、4-酮-3-甲酸甲酯哌啶盐酸盐和对羟基苯甲醛为原料,通过分子间环加成反应和N-烷基化反应,合成了一种潜在的多巴胺D4受体拮抗剂3-(4-羟基苄基)-8-甲氧基-1,2,3,4-四氢苯并吡喃[3,4-c]吡啶-5-酮。采用红外光谱、质谱、氢核磁共振谱和元素分析等手段对中间体及产物进行表征。研究结果表明:在分子间环加成反应中,当反应物3-甲氧基苯酚、4-酮-3-甲酸甲酯哌啶盐酸盐与硫酸的物质的量比为1:1:30、反应时间为48 h时,最高收率为49.2%;在N-烷基化反应中,当反应物8-甲氧基-1,2,3,4-四氢苯并吡喃[3,4-c]吡啶-5-酮、4-羟基苯甲醛与三乙酸基硼氢化钠的物质的量比为2:4:5、反应时间为20 h时,最高收率为51.8%。     

家蚕促咽侧体素受体基因克隆及发育表达

文章克隆得到家蚕(Bombyx mori)神经肽促咽侧体素受体基因(Allatotropin receptor,BommoATR),开放阅读框全长为1 254 bp,编码416个氨基酸.Bommo-ATR氨基酸序列的二级结构预测为7次穿膜蛋白,符合GPCR家族成员的典型特征.实时荧光定量PCR结果表明,家蚕脑-咽下神经节复合体中的ATR mRNA在5龄幼虫期表达量最高,其次为蛹后期,蛹前期和成虫阶段表达量最低.其中5龄幼虫第2天表达量最高,1～5 d持续维持较高的表达水平,这可能与保幼激素的合成有关.     

细胞因子受体介导的信号转导途径研究进展

细胞对外界刺激发生生物学效应是与细胞内信号传递分不开的。细胞在生长、增殖、分化等过程中，酪氨酸蛋白激酶(Tyrosine protein kinases，TPK)具有重要的调节作用。细胞内的TPK包括两类：第一类为位于细胞质膜上的TPK，称为受体型TPK，如胰岛素受体、表皮生长因子受体，这些受体具有催化活性；第二类为位于胞浆中的TPK，称为非受体型TPK，如一些底物酶和某些原癌基因(src、yes等)编码的TPK，它们与无催化活性的受体偶联而发挥生理作用。有的细胞因子受体本身无酪氨酸激酶活性、不能依靠受体的活性而活化其它信号分子，但其胞浆存在非跨膜型蛋白酪氨酸激酶(nontransmemberane protein tyrosine kinases，NM-PTKs)介导细胞因子与其受体结合后的信号转导。     

RACK1基因在急性冠脉综合征行PCI术患者外周血中的表达及意义

选取在我院行PCI术的急性冠脉综合征患者66例,用实时荧光定量PCR法分别测定PCI术前及术后3个月时患者外周血单个核细胞中RACK1基因的表达。40名健康者作为对照组。测定结果是:(1)急性冠脉综合征组患者外周血单个核细胞中RACK1 mRNA表达水平明显高于对照组(17.56±4.98 vs 3.11±1.24,P0.05);(2)急性冠脉综合征患者行PCI术3月后,外周血单个核细胞中RACK1 mRNA表达水平较术前明显降低(10.84±3.71 vs 17.56±4.98,P0.05),但仍高于健康者(10.84±3.71 vs 3.11±1.24,P0.05)。RACK1在急性冠脉综合征患者外周血中表达上调,其表达水平可能和病情进展相关。