不同倍性(2×、3×、4×)鸭梨基因组DNA甲基化水平与模式分析

以鸭梨(Pyrus.bretschneideri Rehd.cv.‘Yali')多倍体(2×、3×、4×)为材料,应用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)技术研究不同倍性鸭梨基因组DNA甲基化水平及模式变化.共筛选22对引物,平均每对引物产生约50条带,统计100～500 bp的扩增带,共计954个位点.分析表明:鸭梨2×、3×、4×分别检测到831、886、852个位点,发生甲基化位点分别占15.5%、20.0%、16.8%,其中全甲基化占9.7%、11.9%、9.7%.分析这些位点甲基化模式表明:甲基化模式在三个倍性间类型相同的占所检测位点的69.2%,仅两种倍性相同的为25.4%,各不相同的占5.5%,其中三倍体41.4%甲基化位点发生改变,显示出独特的DNA甲基化特点.     

金堂黑山羊FSH受体基因在酿酒酵母细胞中的表达与定位

通过激光共聚焦显微镜对卵泡刺激素受体（FSHR）FSHRA和FSHRB与绿色荧光蛋白（GFP）的融合蛋白的表达和定位进行观察,发现FSHRA和FSHRB不仅在酿酒酵母细胞中有表达,而且表达的蛋白质主要定位在酵母的细胞膜上.     

变性剂对重组牛肠激酶活性的影响

肠激酶(EK,EC 3.4.21.9)是一种在基因工程产品中广泛应用的工具酶.以小分子荧光物质Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-β-萘胺为底物,采用荧光跟踪法研究了变性剂盐酸胍、硫脲、尿素对重组牛肠激酶(rEK)活力的影响及抑制动力学.结果表明:盐酸胍、硫脲、尿素均对该酶的活性有较强的抑制作用,它们对该酶的半抑制浓度(IC50)分别为0.025,0.080和0.750 mol/L.研究的3种变性剂对该酶的抑制均显示可逆抑制机理;抑制类型也均为竞争性类型,测定它们对酶的抑制常数KI分别为0.015,0.060和0.553 mol/L.     

短小芽孢杆菌木聚糖酶的同源建模及分子动力学模拟

克隆并测序来源于短小芽孢杆菌的木聚糖酶基因,测定其编码产物的理化件质并鉴定其表达产物为常温酶蛋白.利用同源建模构建出具有较高精度的三级结构模型,并进行优化和评估.利用分子动力学模拟木聚糖酶基因对热不稳定的分子机制,了解影响该酶热稳定性的因素,寻找对热不稳定性的区域.通过与嗜热木聚糖酶比较发现,两者在3个区域的分子动力学...     

花生AhNCED1重组蛋白原核表达与二级结构初步分析

9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)是调控ABA生物合成的关键限速酶.根据花生叶片中克隆得到基因AhNCED1,构建融合蛋白重组表达载体,将重组质粒转化到大肠杆菌DH5a中诱导表达,SDS-PAGE分析显示在0.2 mmol/L IPTG、4 h、28 ℃的条件,目的蛋白以可溶形式高效表达,分子质量在66.0 ku左右.AhNCED1重组蛋白可与制备抗体特异性结合,呈现典型的不规则卷曲结构.     

H5亚型禽流感病毒HA基因昆虫/杆状病毒系统的表达及对BALB/c小鼠的免疫保护

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1／96 H5N1亚型1．7kb HA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacA的蜜蜂蜂毒素分泌信号下游中,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染Sf9昆虫细胞。将重组杆状病毒感染HFive细胞,72h左右收获细胞,超声波裂解,SDS—PAGE结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得表达。蛋白胶薄层扫描分析显示:表达的HA蛋白占重组杆状病毒感染细胞总蛋白含量的17．1％。Western-blot 及血凝实验结果显示,表达的禽流感H5N1亚型病毒HA蛋白具有生物学活性。表达的H5 HA蛋白定量乳化后,皮下多点注射免疫SPF 级BALB/c雌性小鼠,免疫后产生了H5 HA特异抗体,并在三免前后达到并保持较高水平。用致死剂量的HPAIV H5N1攻击小鼠,免疫组小鼠提供了100％的保护力,而对照组小鼠先后发病且死亡:为研制禽流感H5N1亚型病毒亚单位疫苗,防制禽流感奠定了基础。     

我国不良资产处置实证分析

银行不良资产问题的解决不仅直接关系到银行的发展,而且关系到国有企业的改革乃至金融体系的稳定和整个社会经济的健康成长.在我国金融市场蓬勃发展的前提下,研究适合我国金融环境中应用的不良资产处置方法对我国的不良资产处置工作具有积极的指导意义.     

瑞氏木霉过量表达重组蛋白的机制、表达调控及应用研究进展

丝状真菌瑞氏木霉(Trichoderma reesei)具有很强的分泌纤维素酶的能力.近年来,利用基因工程的手段对瑞氏木霉进行遗传改造,构建高效表达载体,产生具有新性状的重组菌株,用以过量表达同源和异源蛋白的研究取得了新的进展.本文就在瑞氏木霉分泌重组蛋白的机理、表达调控及应用等研究方面的分子生物学最新进展作一综述.     

类杂芪分子一阶超极化率与Gibbs自由能、基态重组能之间的非线性相关特性

通过光谱分析,从类杂芪分子的基态到第一电子激发态的紫外－可见吸收光谱中,得到了类杂芪分子在溶剂中的基态和第一电子激发态间的Ｇｉｂｂｓ自由能差和基态重组能,通过相关分析,发现在所研究的溶剂中,类杂芪的分子一阶超极化率和Ｇｉｂｂｓ自由能、基态重组能之间具有非线性相关特性,进一步分析发现不同类杂芪分子在同一种溶剂中的分子一阶超极化率不仅和相邻碳碳单双键的平均键长变化（ＢＬＡ）之间具有非线性相关特性,而且     

单排CT轴位螺旋扫描加冠状面重组技术在鼻腔鼻窦检查中的应用

CT扫描是鼻腔鼻窦的首选影像学检查方法,虽然轴位CT扫描能提供重要的解剖学数据,但有些解剖细节需要在冠状位像上才能直观、清楚地显示.现搜集147例患者的鼻腔鼻窦CT影像资料,研究在单螺旋扫描条件下,利用多层面重组(multplanar reconstruction,MPR)技术,在轴位螺旋扫描后,重组符合诊断要求的鼻腔鼻窦冠状位像.