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361.
目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(49~1 587 bp)、pMET A/NA(121~1 200 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了依据。 相似文献
362.
邓兆红 《长春师范学院学报》2015,(3):72-76
泛化表达是一种高频使用的多词序列。本文从语用身份出发,以MICASE学术口语语料库中的泛化表达or something为例,分析了泛化表达在语篇特征、话语内容、言语行为方面的话语实践。在机构身份和关系身份相对稳定的学术口语中,泛化表达有助于交际者通过操控话轮转换、修正话语内容和调整言语行为的语力,建构适切的话语语用身份,满足当前语境下的交际需求。 相似文献
363.
【目的】分析薄荷转录因子MhWRKY57的基因和氨基酸特性、亚细胞定位、转录活性、组织表达及茉莉酸甲酯处理下的基因表达水平,为揭示MhWRKY57响应茉莉酸信号调控薄荷精油合成的分子机制提供理论依据。【方法】 利用薄荷转录组数据,采用RT-PCR方法获得MhWRKY57基因编码序列,利用生物信息学分析其基因和氨基酸特性,烟草叶片瞬时表达系统进行亚细胞定位,酵母双杂交系统分析转录激活活性,实时荧光定量 PCR (qRT-PCR)技术分析MhWRKY57基因在各组织及茉莉酸甲酯诱导下的表达模式。【结果】 获得薄荷MhWRKY57基因的编码序列(CDS),编码276个氨基酸,具有典型的WRKY结构域,含34个磷酸化位点,属于非跨膜亲水蛋白,定位于细胞核且具有转录激活活性。系统进化分析表明,薄荷MhWRKY57与大豆Glyma.01G056800.2.p亲缘关系最近。qRT-PCR分析结果表明,MhWRKY57基因在幼叶、成熟叶、花、茎、根中均表达,在根和叶中均明显受到茉莉酸甲酯诱导表达。【结论】 MhWRKY57是一个响应茉莉酸信号的转录因子,可能参与茉莉酸信号介导调控的薄荷精油合成过程。 相似文献
364.
365.
骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)—6属于转化生长因子(transforming growth fac-tor)—β超基因家族,在骨的形成中具有重要作用,并受雌激素选择性上调.本研究利用RT—PCR从人胎盘组织中扩增BMP—6成熟肽的DNA片段,克隆到pGEx—5x—1中,构建GST—BMP6融合蛋白表达载体pGEx—BMP—6,转化E.coli DH5a.克隆质粒转化的工程菌,经IPTG诱导4h后,高效表达GST—BMP6融合蛋白,在SDS—PAGE上出现一新蛋白带,分子量约为42kD,约占总蛋白的25%,表达产物以包涵体形式存在.菌体超声破碎,经0.3%N—十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解包涵体,离心后的上清液加入0.6% Triton x—100整合SKL,然后利用谷胱甘肽Sepharose—4B亲和层析纯化.结合GST—BMP6的介质经洗涤、xa因子酶切得到纯度达95%的rhBMP—6蛋白。 相似文献
366.
水稻精细胞基因RSSG58启动子的克隆分析及表达载体构建 总被引:2,自引:0,他引:2
根据分布的水稻基因组测序的比较和水稻精细胞优势表达的RSSG58基因cDNA序列,以水稻品种“桂朝2号”黄化苗组DNA为模板,用PCR方法克隆出RSSG58在起始密码子以前的上游调控序列Pr58,经过Pr58启动子进行的鉴定和分析表明,具备大多数高等植物启动子的保守元件,预计它的RSSG58基因在特异表达方面具有一定的作用。为了鉴定RSSG58基因的基本启动子元件,将RSSG58基因5′侧翼序列做缺失片段分析,由PCR从Pr58中得以3个不同大小两端带有HindⅢ,BamHⅠ酶切位点的片段Pr58Ⅰ,Pr58Ⅱ和Pr58Ⅲ,定向插入载体pMGFP4(pBI221改建,报告基因为GFP)中,取代原有的CaMV35S启动子,构建了由驱动报造基因GFP的植物表达载体pRGFPⅠ,pRGFPⅡ和pRGFPⅢ,用于农杆菌介导法水稻遗传转化。其目的是为进一步在模式植物中研究其表达功能奠定基础。 相似文献
367.
克隆、表达和纯化禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为筛选与NS1相互作用的宿主蛋白以及深入研究NS1蛋白的功能打下基础.根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列,设计并合成一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增AIV NS1基因,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a载体上,经酶切分析及序列测定正确后,鉴定出NS1基因的阳性重组子.阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,通过Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对NS1蛋白进行纯化.结果成功克隆H5N1亚型AIV的NSl基因,其核苷酸序列长度为678 bp,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,表达产物在上清及包涵体中均有表达.经纯化,目的蛋白纯度高达90%,成功表达纯化出28KD的NS1融合蛋白并鉴定其免疫学活性.成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础. 相似文献
368.
构建鸡Tβ4基因串联体(2Tβ4)原核表达体系,利用Ni-NTA纯化重组2Tβ4,MTT法检测其免疫活性.结果表明,构建的PET-32a(+)-2Tβ4表达载体在BL21(DE3)感受态细胞中,经0.05 mmol/LIPTG诱导表达,每克菌体平均可获6.7mg 2Tβ4.2Tβ4对淋巴细胞增殖能力与Tβ4标准品相比无显著差异,证明了所构建的鸡2Tβ4原核表达系统的有效性,为Tβ4的应用提供了基础材料. 相似文献
369.
370.
将含有PSA-L启动子驱动的荧光素酶报告基因(LUC)表达载体导入拟南芥原生质体中,研究报告基因表达量,证明出脱落酸(ABA)影响了报告基因的表达.在有ABA存在的时候,启动子驱动作用减弱. 相似文献