熊去氧胆酸和维甲酸对人成骨肉瘤细胞MG-63细胞周期与分化的影响

以癌细胞诱导分化物维甲酸为平行对照．应用中药有效成份熊去氧胆酸处理人成骨肉瘤Mp63细胞．观察比较熊去氧胆酸及其与维甲酸的组合对Mp63细胞形态、细胞周期及分化的影响．实验结果显示．经熊去氧胆酸、维甲酸及其组合联合处理之后．MG63细胞体积增大．核质比例减少．形态趋于规则．细胞周期发生G0/G1期阻滞．G0/G1期细胞比例显增加．而S期和G2／M期细胞比例则明显下降．细胞终末分化标志物Ⅰ型胶原表达明显增强，骨结节形成数目增多．且结节结构更为典型．其中，熊去氧胆酸和维甲酸联合组对Mp63细胞周期的阻滞及细胞终末分化指标Ⅰ型胶原的表达、骨结节形成的诱导均强于单独处理组．结果表明．熊去氧胆酸具有与维甲酸相近似的诱导人成骨肉瘤Mp63细胞分化的作用．并且两组合具有协同诱导成骨肉瘤细胞分化的效果．     

人骨保护素N端片段在大肠杆菌中的表达及其活性分析

OPG成熟肽N端D1～D4结构域仅由2个外显子编码.以人基因组DNA作为模板,PCR分别扩增骨保护素基因外显子2和外显子3,再以2种PCR产物的混合物作为模板,采用重组PCR法得到N端D1～D4域编码序列,使该序列与载体pET42a部分序列相连,然后克隆人载体pET42a进行表达,SDS-PAGE表明产物主要以包涵体形式存在,可被抗OPG多克隆抗体识别.Glutathione Sepharose4B亲和层析纯化融合蛋白GST-hOPG(D1-4),Xa切割祛除担体蛋白及进一步分离纯化.采用破骨细胞样细胞诱导分化实验来检测重组蛋白的生物活性,证实该重组蛋白可以抑制OLC的生成.     

VMP1基因的克隆及其抗体的制备与鉴定

为了得到效价高、特异性强、能用于检测内源性 VMP1 蛋白的抗体,采用RT-PCR 法,从L929细胞株中克隆鼠VMP1基因,重组入pCMV5载体,用 PCR 扩增与其氨基酸 132-239 区域对应的DNA片断,将该片段连接到原核表达载体 pGST parallel 中,在大肠杆菌 BL21 菌株中大量表达,经谷胱甘肽-琼脂糖树脂纯化后,得到高纯度的 VMP1抗原.免疫新西兰兔,获得抗 VMP1 蛋白的兔抗血清,将血清纯化后即得到抗 VMP1 的多克隆抗体.用 Western blot 分析手段检测了该抗体的特异性及效价.在用该抗体检测外源性和内源性 VMP1 蛋白的试验中,证实该抗体效价高,特异性强,效果很理想.此方法可用于获得大量廉价的抗 VMP1 蛋白的高滴度和高特异性的抗体,为进一步研究 VMP1 在细胞内,尤其是在信号转导通路中的功能和作用奠定了基础.     

面向增量信息自动化提取的居民地时空变化分类研究

居民地数据是一类重要的地形数据,其变化非常频繁.当居民地数据更新以后,数据生产者如何提取增量信息并及时发布给用户是迫切需要解决的问题.增量信息是由于居民地的变化引起的,不同的变化产生的增量信息存在很大差异,因此分析居民地的变化是实现增量信息发布的一个重要前提.本文着重于分析居民地变化的分类及其描述.基于变化的4个相关因子,提出了居民地变化分类模型,并利用规则表达式(IF-THEN)描述了各种变化类型及其产生的增量信息.最后,以我国1:25万地形数据库的居民地数据的增量信息生成验证了上述思想.图3,表1,参6.     

重组SARS冠状病毒S蛋白的原核表达研究

目的克隆表达SARS冠状病毒的主要结构蛋白(S蛋白)。方法合成SARS冠状病毒S蛋白特异性基因片断并克隆入pET32a原核表达载体,转化BL21菌,经IPTG诱导高效表达得到重组S蛋白,并通过W estern印迹对重组蛋白质进行鉴定。结果重组蛋白质经镍柱亲和层析得到了部分纯化,免疫动物后得到SARS病毒的多克隆抗体。结论经E lisa检测,表达的重组S蛋白基本具备检测病人血清中抗SARS病毒IgG和IgM的能力,可进一步用于S蛋白功能研究与SARS诊断试剂盒的研制。     

鲢（Hypophthalmichthys molitrix）IL-10基因的克隆及表达分析

白细胞介素10（IL-10）是一种作用广泛的抗炎细胞因子，主要功能是限制和最终终止炎症反应. 用RACE （rapid amplification of cDNA ends）-PCR方法扩增出鲢白细胞介素10（IL-10）的cDNA，其全长为1248nt，包含5′非编码区156nt，3′非编码区552nt，开放阅读框540nt．鲢IL-10的开放阅读框编码179个氨基酸，其中包含构成两对二硫键的4个保守半胱氨酸．RT-PCR结果显示鲢IL-10mRNA主要在脾脏、鳃、头肾和肌肉中表达．将鲢IL-10完整开放阅读框克隆到原核融合表达载体pET-32a-c（+）上，转入大肠杆菌Rosetta-gami（DE₃） 内进行表达，经SDS-PAGE电泳后显示重组融合蛋白在分子量约39ku处有明显表达带，与预期分子量大小一致，且主要以不可溶的包涵体形式存在．变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白，将其免疫家兔，获得兔多克隆抗鲢IL-10抗体，Western blot检测到兔多克隆抗鲢IL-10抗体可有效地与重组蛋白结合．这些结果为进一步研究IL-10的功能奠定了基础．     

利用大麦寡核苷酸芯片分析小麦种间杂交种与亲本之间根系基因表达谱

大量报道表明，杂种优势的形成与杂种一代中亲本基因的表达方式改变有关.为了深入研究小麦杂种优势形成机理，分析了小麦种间杂交种3338/2463在分蘖盛期地上部以及9个根系性状的杂种优势.结果表明总根长、根表面积、根体积、根干重和叶干重等5个性状表现明显的杂种优势.在测定小麦种间杂交种3338/2463根系性状杂种优势基础上，利用大麦寡聚核苷酸芯片，研究了上述杂交种与其亲本之间根系基因差异表达.结果发现，有1187个基因在杂种与亲本之间存在表达差异.差异表达模式可以分为8种类型，即杂种特异型、杂种沉默型、亲本特异型、亲本沉默型、杂种上调型、杂种下调型、杂种偏高亲和杂种偏低亲.利用半定量RT-PCR技术对14个差异表达基因的表达模式进行验证，发现9（64.29%）个基因与芯片的表达类型完全一致.利用GeneOntology分析对差异表达的基因进行分类，表明差异表达基因涉及植物生长代谢的各个过程.将差异表达基因进行电子定位分析，发现差异表达基因散布在小麦的各条染色体的Bin上，分布在第一到第七部分同源群上的差异表达ESTs分别为158，148，121，140，132，94，127个.     

地理要素多尺度表达的基本问题

地理要素的多尺度表达问题是目前GIS亟待解决的问题之一.针对国内外该领域的研究进展,探讨了多尺度表达的内涵,从多尺度空间数据库建库的角度,重点评述了GIS地理要素多尺度表达领域在形式化描述、数据结构、数据存储、智能缩放显示等方面的研究历程和现状,剖析了目前存在的目标内连、一致性维护、动态查询、协同更新等方面的学术问题,指出了未来几年内多尺度表达研究的方向和重点,对多尺度GIS的研究和开发具有一定的借鉴意义.     

英语中因果关系的表达

英语中表达因果关系的方式多种多样,如从属连词、并列连词、介词、介词短语、分词(形容词、副词) as从句、不定式、非限制性定语从句,以及独立主格蛄构等形式。准确把握因果关系的表达,对提高人们英语运用水平是必要的,也是有益的。     

Cloning, prokaryotic expression,purification and sequence analysis of 20S proteasome subunit gene from T.harzianum

The gene encoding the 20S proteasome subunit（PR29） was cloned from cDNA library of Trichoderma harzianum and expressed in Escherichia coli BL21 （D3） using a pET-28a expression system. The molecular weight of the protein was found to be approximately 29 kDa, as estimated by SDS-PAGE on gels. The target protein was insoluble when induced at 22℃ with 0.4 mmol/L IPTG, while dissoluble if induced at 37℃ with 0.8mmoL/L IPTG. The expressed product was purified through Ni-magnetic beads His Bind. The purity of the fusion protein reached above 80%. The entire eDNA sequence consisted of 1094 bp with 173 and 135 bp in 5＇ and 3＇ untranslated regions respectively. The gene encoding 261 amino acids has no signal peptide sequence. These results could provide a basis for validating the func-tions of PR29. It also provided a preliminary indication for further study of the mechanism and function of proteasome, and more information of proteasome mechanism in T.harzianum could be obtained.