丙型肝炎病毒NS3基因真核质粒的构建及其在人肝细胞中的诱导表达

目的：进行丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因真核表达载体的构建,并分析其在体外培养的人肝细胞中的表达。方法：从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM／HCV1-3011表达载体中PCR扩增出HCVNS3基因片段,将其与表达载体pcDNA3．1（-）重组,得到重组的真核表达载体pcDNA3．1（-）／NS3。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,以免疫组织化学SP法及Western Blotting检测HCVNS3蛋白的表达。结果：所得到的NS3片段正确,序列正确,所构建的真核质粒成功转染QSG7701细胞并表达蛋白,表达的NS3蛋白相对分子质量为70000。结论：成功构建了丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因的真核表达载体pcDNA3．1（-）／NS3,并且该载体在体外培养的人肝细胞中能有效表达特异性HCVNS3蛋白。     

福清城头镇人群乙肝血清流行病学调查结果

目的：为了解城头镇人群己型病毒性肝炎（乙肝）流行现状,评价实施乙肝疫苗免疫15年后,人群乙肝病毒（HBV）感染的血清流行病学变动趋势。确定城头镇人群乙肝的综合预防控制策略。方法：采用多阶段分层整群随机抽样方法,对全镇29个行政村1－59岁人群共1500人进行了乙肝血清流行病学调查,并用酶联免疫法检测了乙肝病毒表面抗原（HBsA曲、乙肝病毒表面抗体（抗－HBs）。结果：城头镇调查人群HBsAg、抗－HBs、阳性率分别是7．2％、52％,与1992年病毒性肝炎血清流行病学调查结果9．75％的HBsAg携带率相比全人群HBsAg携带率下降26．36％。结论：接种乙肝疫苗是控制人群HBV感染的有效措施,能明显提高抗－HBs阳性率,降低HBsAg携带率,提高人群对HBV的免疫保护能力。     

原儿茶酸与拉米夫定体外联合抗HBV药效学研究

为观察拉米夫定(3TC)与原儿茶酸(PA)联合应用抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用,在HepG2.2.15细胞培养液中分别加入适当浓度的3TC、PA、3TC+ PA溶液,每4d换用含相同药物浓度的新鲜培养液,第8天末取上清液,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测上清液中HbsAg和HbeAg的量,用荧光定量PCR( F...     

慢性乙型肝炎患者HBV基因分型与疾病严重程度的相关性研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者HBV基因分型与病情严重程度的相关性。方法对105例慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA阳性的标本,采用PCR-反向点杂交法测定HBV基因分型,同时检测患者的肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、谷氨酰转肽酶(GGT)。结果 105例HBV-DNA阳性的标本中B型、C型、非B非C型各为45例、45例和15例,分别占42.9%、42.9%和14.2%。各型在病情和肝功能指标ALT、AST、TBil、GGT的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论慢性乙型肝炎患者HBV基因分型与病情严重程度没有相关性。     

甲/戊型肝炎病毒重组抗原基因的克隆及表达

 将甲肝病毒vp1编码基因(aa 24~171)和戊型肝炎病毒ORF2基因(aa 431~615)通过一段编码柔性甘氨酸链(Gly4 Ser Gly4)的基因片断连接,获得编码HAV/HEV融合蛋白基因(AEAg342).将该融合基因插入质粒pBV220,构建表达质粒pBV220-AEAg342.将pBV220-AEAg342转化入大肠杆菌BL21中进行表达,表达量约占菌体总量的20%,经离子交换层析纯化,目的蛋白纯度达90%以上.Western blot证实该蛋白能与甲肝及戊肝患者阳性血清发生特异性反映,为进一步开发双价疫苗和联合诊断试剂奠定了一定基础.     

HCV全长cDNA细胞培养适应性突变体的构建及其体外转录制备感染性RNA的研究

运用重叠延伸PCR方法对HCV全长基因组cDNANS3和NS5A上的E1202G、T1280I和S2197P进行细胞培养适应性突变,构建含有细胞培养适应性突变的HCV全长基因组cDNA,体外转录制备RNA,脂质体法转染人肝癌细胞Huh-7,以RT-PCR检测HCV正、负链RNA,间接免疫荧光法和Western blot检测细胞内HCVNS3蛋白的表达。结果证明,转染后细胞内可间断检测到HCV正、负链RNA及HCVNS3蛋白的表达,且突变体RNA与未突变的HCVRNA相比,明显具有更高的复制效率和蛋白表达。该研究为后续HCV体外培养体系的研究提供了可在细胞内高效自主复制的HCV病毒模板。     

应用PCR法检测庚型肝炎病毒感染

应用逆转录套式ＰＣＲ法检测了４８例丙型肝炎、２６例乙型肝炎及１２例甲乙丙丁戊型肝炎病毒感染标志均阴性的肝炎患者血清中的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ，结果表明我国肝炎患者中存在ＨＧＶ感染；ＨＧＶ可单独感染或与其它肝炎病毒混合感染，丙型肝炎患者中，ＨＧＶＲＮＡ的检出率为１０．４％，乙型肝炎患者中的检出率为３．８％，而在甲乙丙丁戊型肝炎标志均阴性的肝炎患者中的检出率为３３．３％，ＨＧＶ与其他肝炎病毒的混合感染可加重肝脏的损害，ＨＧＶ感染是甲乙丙丁戊型肝炎标志均阴性肝炎的重要病因之一     

4955名献血者抗-HCV阳性调查

本文对吉林省辽源地区所属市、县4955名献血者进行抗-HCV检测。调查结果表明辽源地区抗-HCV阳性率1.59％。其中ALT正常献血者阳性率1.29％,ALT升高(30～200单位)献血者阳性率为15.97％。因此人们要对HCV引起重视,加强对HCV的防治工作,切断传播途径,管理好传染源,做好易感人群的保护,以减少疾病的发生,控制HCV传播。     

戊型肝炎病毒流行病学研究进展

戊型肝炎(HE)是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的自限性的非甲非乙型肝炎。该病毒主要经由肠道传播,常引起爆发或流行,临床症状类似甲型肝炎(甲肝),但临床表现较甲肝严重,并可出现肝内胆汁淤积甚至发展为慢性肝炎[1],主要发生在青壮年,男性高于女性[2,3],其发病重,病死率高。也有报道称,年龄越高其感染率越高[4],戊肝所致的人群死亡率在0.5%-1.5%之间,在孕妇和老年人中高达20%以上[5,6]。我国是戊肝流行的主要地区之一,戊肝的发病率和感染率均较高,约占临床散发性     

程良斌：发挥中医特色治疗肝病——记湖北省中医院程良斌教授

乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球面临的严重的公共卫生问题，现代医学对慢性乙型肝炎尚没有特异性治疗，多根据临床或病理学检查予以抗病毒、免疫调节、抗炎和抗纤维化等对症治疗。但抗病毒治疗应答差，停药复发率高，经干扰素治疗的副作用较多，经核苷类药物治疗的患者存在长期服药以及病毒变异相关问题，且两者治疗费用相对较高。