蒙古口蘑与双孢蘑菇原生质体融合育种研究

以蒙古口蘑和双孢蘑菇为出发菌株,研究了酶浓度、酶解时间、菌龄和渗透压稳定剂、再生培养基等对蒙古口蘑和双孢蘑菇原生质体制备和再生的影响.结果表明,蒙古口蘑原生质体制备和再生的最佳条件是,培养5 d的菌丝体用2.5%(w/w)的溶壁酶酶解4 h,渗透压稳定剂为0.6 mol/L KCl,MB为再生培养基,制备率为7.53×1010个/L,再生率为8.4×10-4;双孢蘑菇原生质体制备和再生的最佳条件是,培养5 d的菌丝体用2%(w/w)的溶壁酶酶解3 h,渗透压稳定剂为0.6 mol/L KCl,PQA为再生培养基,制备率为6.96×1010个/L,再生率为7.4×10-4.对两种菌原生质体的释放过程进行形态观察,均为顶端释放.采用双亲灭活原生质体融合技术对蒙古口蘑和双孢蘑菇原生质体融合进行研究,蒙古口蘑原生质体采用热灭活,65℃处理30 min,灭活率达100%,双孢蘑菇采用紫外灭活,在15 W紫外灯下,距离30 cm,处理20 min,灭活率达100%,两菌株按1∶1混合,以30%PEMG(6 000)为促融剂,融合10 min,融合率为5.6×10-5.经遗传稳定性检验,融合菌株的遗传稳定率为80%,从菌落特征、菌丝形态、菌丝生长量、酯酶、游离全蛋白、乳酸脱氢酶、乙醇脱氢酶和过氧化物酶等同工酶方面对融合子进行筛选,获得一株具有双亲性状的融合株.     

紫外诱变选育秦巴山区黑木耳耐高温菌株的研究

以秦巴山区黑木耳主要栽培菌株为材料,采用不同紫外照射时间和温度梯度筛选高温黑木耳品种。结果表明,黑木耳原生质体紫外诱变的最佳时间为120¹80 s,再生菌落的致死率为64%180 s,再生菌落的致死率为64%⁸2%,通过40℃高温初步筛选得到适合秦巴山区栽培的黑木耳菌株YBZ4。     

鸟苷产生菌解淀粉芽孢杆菌的选育

出发菌GR001通过形态观察、生理生化实验、16S rDNA同源性序列分析及部分特异性基因序列分析鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以GR001为出发菌,通过化学诱变选育出一株遗传标记为腺嘌呤营养缺陷、6–巯基嘌呤抗性以及蛋氨酸亚砜抗性(Ade-+MSOr+6-MPr)的突变株GR600.以GR600为受体菌,采用原生质体转化法获得转化子GR607(Ade-+MSOr+6-MPr+kmr),鸟苷产量高达20.82,g/L.     

霍山石斛原生质体制备条件初探

本实验采用机械法和酶解法对霍山石斛原生质体的分离条件进行研究。结果表明,机械法制备霍山石斛原生质体,得率很低。正交试验法优选出的酶解法最佳组合条件为:纤维素酶1.5% 果胶酶1.5% 离析酶1.0%的酶液组合(溶于0.6mol/L的甘露醇),pH值5.4,28℃温育18 h。     

光合细菌种间原生质体融合及融合子鉴定

以浓度为3mg/l的溶菌酶溶液处理对数生长期的光合细菌球形红假单胞菌(丙酸钠~-)和沼泽红假单胞菌(甘露糖醇~-)50min,获得两菌体形成的原生质体,再生率分别为86％和62％。等量的两亲株原生质体在35％聚乙二醇(PEG,MW.6000)诱导下融合5min,融合率为2.1×10~(-4)。经影印法鉴定,生成的融合子可以分别在丙酸钠和甘露糖醇为唯一碳源的培养基上生长。融合子的体积为3.63um~3,约为两亲株的体积之和。融合子菌落形态特征界于两亲株之间,其降解底物中有机物COD_(cr)的能力,优于任一亲本菌株。获得的融合子杂种细胞,存在着高效降解利用机污染物的优势。     

糖化酵母原生质体诱变育种的研究

采用单一因素多次诱变的方法,对糖化酵母原生质体进行诱变育种,结果表明该方法对提高糖化酶活力有一定效果。经测定,诱变株同化、发酵淀粉的能力均有改善。     

环孢菌素A产生菌的分子鉴定及其原生质体制备

环孢菌素A高产菌株No.421502经形态学特征和分子标记鉴定,确认为镰孢菌属,命名为Fusariumsp.No.421502.收集Fusarium sp.No.421502孢子刚萌发的幼嫩菌丝体,以0.7 mol/L KCl为渗透压稳定剂,用质量浓度为20 mg/mL的蜗牛酶,30℃80 r/min处理5 h制备原生质体.原生质体为7×105/mL,原生质体形成率为62.8%.制备的原生质体稀释后接入再生培养基,再生率为29.6%.     

Ｌogistic方程在柑桔原生质体耐热性测定中的应用

试验了山金柑（Ｆortunella hindsii Osb.cv.swingle)、Murcott桔橙（Ｃitrus reticulataBlance C.sinensis Osb.sv.murcott)、伏令夏橙（Ｃ.siensis osb.cv.valencia)、伏令夏橙和宁波金柑的体细胞杂种（Ｃ.sinensis F.Crassifolia swingle cv.Meiwa)４种柑桔原生质体及其叶片经高温处理后的原生质体活力、电解质渗出率（％）的变化,配合logsitic方程分别求出自的高温半致死温度（ＬＴ５０）,以此来衡量各品种耐热力的大小。发现原生质体的耐热力大小与叶片耐热力的大小有显著相关性,回归方程为Ｙ＝１．３００７＋０．９８８１(r=０．９７７１）。讨论了原生质体耐热力测定的生理基础。     

降解精对苯二甲酸生产废水特化菌株性能测定

将黄孢原毛平革真菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ,ＰＣ）真核细胞与ＹＺＩ土著细胞原核细胞的原生质体进行融合,构建而成Ｆｈｈ融合子;再将Ｆｈｈ与酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ,Ｙ９９）真菌真核细胞的原生质体进行融合,构建而成Ｆｈｈｈ融合子。Ｆｈｈ与Ｆｈｈｈ是跨真核原核两界细胞的两株融合子,对制霉菌素和链霉素同时存在抗性,孢子和菌丝形态均不同于ＰＣ菌。     

播娘蒿原生质体培养研究

以播娘蒿无菌苗的子叶和下胚轴分离原生质体 ,每克鲜重产量最高达 ( 1～ 1 5 )× 10 6 个 .对原生质体进行液体浅层静置培养 .结果表明 :最佳酶解液酶组成为 4 %纤维素酶 + 2 %果胶酶 + 0 5 %离析酶 ;最佳培养密度为2 0× 10 4个 /mL ;最佳渗透压稳定剂为 10 %蔗糖 + 2 %葡萄糖 .观察表明 :播娘蒿原生质体 1～ 7d内出现第一次分裂 ,分裂频率约 2 0 %,培养 18d时具几十个细胞的细胞团 ,以后逐渐形成肉眼可见的小愈伤组织 .