几种常用的基因敲除技术

随着功能基因组学研究的深入发展，基因敲除技术逐渐成为基因功能研究的重要手段，本文就常用的三种基因敲除技术，即同源重组、插入突变、RNA干扰各自的原理、适用的范围和优缺点作简要介绍。     

环境细菌遗传多样性分析的基因标签串测序法

把研究真核细胞表达基因种类和水平的基因标签串测序法引入环境细菌遗传多样性分析,选择细菌６Ｓ核糖体ＲＮＡ基因（ｒＤＮＡ）内０２６碱基对高变异区段为该基因变异类型的标签,连接成标答中并测序,用标签类型、频率和２多样性指数等参数在分子水平上分析环境细菌遗传多样性,建立了环境细菌遗传多样性分析的基因标签串测序法,该方法在分析环境隐含遗传多样性、提示污染生物学效应和评价环境质量等方面有的应用价值。因使用共同     

番茄ACC合成酶基因的反义RNA—核酶嵌合基因植物表达载体的构建及对番茄的转

将克隆的番茄ACC合成酶基因的反义RNA－核酶联合的DNA序列用Hind Ⅲt KpnI切割后重组于植物表达载体pGA643中,用三亲融全导入农杆菌LBA4404中,采用叶盘法转化茄子叶,诱导出再生小植株,获得了卡那霉素的抗性植株。提取植物总DNA,用pGA643作探针,通过斑点杂交,已筛选出整合有外源基因的工程植株。为进一步研究该嵌合基因对ACC合成酶基因表达的影响及获得商品化的转基因番茄奠定了基础。     

增殖细胞核抗原反义核酸联合5-FU抑制肝癌细胞生长

目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)基因反义寡核苷酸(ASODN)联合5-FU对离体肝癌细胞及小鼠肝癌生长的抑制作用。方法:用5-FU、5-FU联合PCNA ASODN、5-FU联合聚乙烯亚胺(PEI)介导的PCNA ASODN(PEI-ASODN)分别转染人肝癌SMMC-7721细胞,改良MTT法(WST法)分析细胞生长增殖抑制效果;建立小鼠肝癌腋下移植瘤和腹水瘤模型,腋下移植瘤模型小鼠,隔日给药共5次,第13天杀小鼠,观察小鼠瘤重、瘤体积改变;腹水瘤模型小鼠,连续腹腔注射给药7次,记录小鼠平均存活天数,绘制小鼠存活曲线。结果:5-FU联合PEI-ASODN时,5-FU对肝癌细胞的IC50降低为0.165μg/mL,肝癌细胞对5-FU敏感性提高了49.7倍;肝癌腋下移植瘤小鼠各治疗组的瘤重、瘤体积均得到不同程度的抑制,其中以5-FU联合PCNA反义核酸组最高;对于腹水瘤小鼠,以5-FU和PCNA反义核酸联合治疗组平均生存时间最长。结论:5-FU联合PEI-ASODN能有效抑制肝癌细胞增殖,抑制小鼠肝癌的生长,延长小鼠存活时间。     

siRNA沉默DNA甲基化转移酶1基因干扰胎牛成纤维细胞增殖和凋亡

为阐明Dnmt1-siRNA对胎牛成纤维细胞（FBFCs）的影响，设计了3种针对Dnmt1的siRNA来转染FBFCs．结果显示：Dnmt1-siRNA3转染FBFCs 24,48,72 h后，Dnmt1 mRNA表达水平显著降低（P<0.01）．在转染后48 h，siRNA3对Dnmt1抑制效率达到近80%，Dnmt1-siRNA3处理的FBFCs增殖也受到显著影响，FBFC细胞活力下降、处于G₀/G₁过渡期细胞数量增多（P<0.05）．但Dnmt1-siRNA3组FBFC细胞的凋亡率也显著增加（P<0.05）．说明通过Dnmt1特异性siRNA能够有效地敲低FBFC中的Dnmt1 mRNA表达量，由于细胞周期分布变化，siRNA处理后FBFC作为核供体能提高SCNT的效率．     

中国辽宁咽滑刃线虫的形态与分子系统学描述

2018年7月自辽宁省沈阳市枯死华山松(Pinus armandii Franch.)体内分离得到一种非常见的线虫，经光学显微镜初步观察到该线虫在枯死松树内种群单一且数量较多，为研究其与松树枯萎的关系，从形态学和分子生物学特征对该线虫进行系统的描述说明，以确定该线虫的种属，更好地进行线虫的鉴定与分类，并对咽滑刃属线虫的数据库进行补充，便以期为松树枯萎病的相关研究提供理论参考。     

家蚕新的非编码RNA功能初探

构建了家蚕50～500 nt非编码RNA的cDNA文库,发现了189个新的ncRNA,其中一个小RNA-Bm-86在家蚕幼虫和蛹中的表达量显著高于卵和成虫.利用生物信息学软件对该ncRNA的特性及其与上下游基因的关系进行了深入分析,并利用Northern杂交和半定量RT-PCR技术对该ncRNA与其宿主基因在家蚕不同组织的表达情况进行了研究.结果发现,该ncRNA属于H/ACA box snoRNA家族,是由家蚕eIF5A基因的第二个内含子转录产生的,且在家蚕中没有明显的靶标位点.分析其上下游基因结构发现,在其上游263 bp处存在着一个可能的启动子位点,表明其有独立转录的倾向.进一步分析Bm-86与其宿主基因eIF5A在家蚕不同组织部位的表达情况发现,二者在表达上存在着负相关的关系,且该现象在丝腺中尤其明显.推测Bm-86可能通过影响eIF5A基因的表达参与到家蚕丝腺发育调控过程中.     

RNA二级结构点括号图与CT文件表示法的相互转换算法研究

由于RNA二级结构表示方法对其功能和相似性的研究具有关键性作用,通过对现有RNA二级结构的各种表示方法进行讨论,重点介绍了点括号图表示法和二级结构平面图文本（CT文件）表示法,给出二者之间的相互转换算法,并通过实例验证了该转换算法准确、有效,可为研究RNA二级结构的相似性提供有效的数据支持.     

宽口裂腹鱼不同组织总RNA提取与质量分析

本文采取宝生物公司RNAisoplus试剂从宽口裂腹鱼肌肉、脑、肾脏、肝脏、肠、性腺、心脏中提取总RNA,分析了所提宽口裂腹鱼不同组织总RNA的质量高低,及造成质量不同的具体原因,旨在为其他科研工作者在分析RNA质量时提供基础理论依据。