采用正交设计和响应曲面设计法优化芦苇随机扩增多态DNA体系

采用正交设计和响应曲面设计(RSD)优化适合于芦苇[Phragmites australis (Cav.)Trin.ex steud]增多态DNA(RAPD)的反应体系,结果确定芦苇RAPD反应体系的最佳方案为：在PCR扩增程序,冷启动,94℃变性1min,36℃复性90s,72℃延伸2min,40个循环;72℃延伸7min,4℃保存;25μl反应体系包括模板DNA 60ng、三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)7．5mmol、Taq酶1．5u、引物5pmol。     

运用RAPD技术检测Cu2+对草鱼基因组DNA的影响

对草鱼腹腔注射了CuSO4,抽取注射前后其血液以提取基因组DNA。选用10个随机引物对草鱼基因组DNA进行了RAPD扩增,结果表明:5个引物能产生1～5条扩增带,扩增产物分子大小在200～3500bp之间,其中引物S15和S16能检出用CuSO4染毒前后草鱼基因组DNA的差异。CuSO4可使草鱼基因组DNA发生改变,应对其使用加以限制。     

Quantitative Estimates of Outcrossing Rates in a Natural Population of Caldesia grandis （Alismataceae）

Outcrossing rate in a natural population of Caldesia grandis was estimated by the dominant random amplified polymorphism DNA (RAPD) marker using 10 open-pollinated progeny arrays of 24 individuals. The multilocus outcrossing rate estimated based on all 25 RAPD loci was 0.872 ±0.033 and the single-locus outcrossing rate was 0.795 ±0.032. Multilocus estimates did not differ significantly from the single-locus estimates. The fixation index, F, in the progeny estimated from RAPD data was -0.142 ±0.000. The estimates of multilocus outcrossing rates (t_m) and single-locus outcrossing rates (t_s) obtained from MLDT clearly indicate that outcrossing is predominant in the open-pollinated C. grandis population. An empirical analysis suggests that 15 should be the minimum number of dominant marker loci necessary to achieve robust estimates of t_m.     

猕猴属种间及亚种间RAPD分析

应用ＲＡＰＤ技术分析了猕猴属（Ｍａｃａｃａ）种间和亚种间６个分类群之间的遗传多态性,共筛选出１６个随机引物每个分类群平均获得７７个遗传标记,根据遗传距离构建了系统发育进化树,结果显示从ＲＡＰＤ数据分析得到的６个分类群的相互关系与形态、同功酶、ｍｔＤＮＡ的研究结果基本一致．表明ＲＡＰＤ技术适用于猕猴属中近缘种间和亚种间的分类分析．     

珍珠黄杨两个天然群体遗传多样性的RAPD分析

以珍珠黄杨为材料,研究了RAPD 分析过程中的模板DNA、Mg2+、随机引物、dNTP、TaqDNA聚合酶等影响因素,建立了适于珍珠黄杨RAPD分析的 PCR 反应体系,并在此基础上对珍珠黄杨两个天然群体的遗传多样性进行了分析。从200个随机引物中筛选出14个引物共检测出个161个位点,其中多态位点137个。用POPGEN32版软件对数据进行了分析,结果表明:多态位点百分率为8509%,Shannon’s信息指数为05492,Nei’s基因多样性为03711,珍珠黄杨具有较高的遗传多样性。     

RAPD技术探讨几种家鸭与野鸭遗传多样性及亲缘关系

用RAPD技术分析我国常见家鸭品种（系）金定鸭(I、II、III系)、绍兴鸭、巢湖鸭、大余鸭、莆田黑鸭(I、II系)、连城白鸭、北京鸭,及引进品种番鸭和野鸭斑嘴鸭、绿头鸭基因组DNA的多态性.24个引物中,有19个共扩增出283条带,分子量约在400～2000bp之间,13个样品共有的条带数只有27条.根据扩增得到的RAPD图谱计算了不同样品间的遗传距离（D）和遗传相似系数.绿头鸭、斑嘴鸭与家鸭品种(系)间的遗传距离分别在0.2240～0.3092和0.2880～0.3735之间,方差分析表明两组数据不存在显著差异(p＞0.05).并依据D值由UPGMA聚类分析软件绘制了它们的分子进化树.     

不同种群灰飞虱(Laodelphax striatellus)的RAPD分析

用RAPD技术对9个不同的灰飞虱地理种群的DNA多态性进行了研究。按Neighbor-joining聚类法构建了这9个种群灰飞虱的分子系统树。该系统树分为2簇,簇1包括我国北京、福建、海南、辽宁、四川、上海、云南地区的灰飞虱种群,簇2包括宁夏地区和日本东京地区的2个灰飞虱种群。研究表明,不同地区灰飞虱种群的遗传距离与其地理距离不呈相关性。     

产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的了解吉林市区肺炎克雷伯菌CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因型分类及耐药情况,并对其分子流行病学特征进行分析.方法采用PCR扩增法检测118株肺炎克雷伯菌产CTX-M型ESBLs基因型情况,调查其阳性株对14种常见抗菌药物的耐药情况,对产CTX-M型肺炎克雷伯菌进行AP-PCR同源性分析,并绘制基因分析图谱.结果 118株肺炎克雷伯菌中共扩增出CTX-M型菌株25株,占21.19%;其中CTX-M-1组13株,占11.02%;CTX-M-9组16株,占13.56%;同时含CTX-M-1组和CTX-M-9组菌株4株,占3.39%;扩增未发现CTX-M-2组、CTX-M-8组和CTX-M-25组阳性株.25株产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶均为多重耐药菌（耐3种以上抗菌药物）,对红霉素耐药率高达100%;其次耐药率依次为头孢噻肟92%,氨苄西林92%,四环素88%;对亚胺培南耐药率较低,对美罗培南均敏感.25株CTX-M型阳性菌株做随机扩增多态性分析,共发现13种RAPD.结论吉林市区产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶菌株均为多重耐药,且对红霉素、头孢噻肟和氨苄西林类耐药率均很高.CTX-M酶在一定程度上存在克隆传播.     

转基因鱼试验湖浮游生物群落DNA指纹拓扑结构与优势种的关系

针对多福转基因鱼试验湖的浮游生物群落进行了随机扩增多态性DNA(RAPD)研究，并与优势种类组成进行了相关分析. 结果显示：9条引物共检测到76条长度在200—1200bp的谱带，其中共有带占5.3%，特有条带占40.8%，谱带多态率为94.7%；共观察到的25种优势种中有长额象鼻溞(Bosmina longirostris)、近邻剑水蚤(Cyclops vicinus)、螺形龟甲轮虫(Keratella cochlearis)、角甲藻(Ceratium hirundinella)和圆筒锥囊藻(Dinobryon cylindricum)为6个采样点共有的优势种. 基于RAPD标记和优势种类组成的聚类分析都将6个采样点划分成3类：Ⅲ，Ⅴ和Ⅵ站聚为一类，Ⅱ和Ⅳ为一类，Ⅰ站为单独的一类. 这表明DNA指纹拓扑结构反映的群落结构与优势种类的组成是一致的. 因此，浮游生物群落DNA指纹分析使得在分子水平进行湖沼生物学比较研究成为可能，并能在积累不同水体浮游生物群落遗传多样性资料的同时有可能为转基因鱼释放后的评价提供参考.