猫细小病毒 PCR 检测方法的建立及初步应用

摘要: 目的 建立猫细小病毒 PCR 检测方法,应用于猫临床样本中 FPV 的快速检测。方法 根据已发表的 FPV VP2 基因序列设计合成引物,并以此建立 FPV 的 PCR 检测方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证。 用建立的方法对 33 份猫临床样品进行检测。结果 建立的 FPV PCR 检测方法与猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)、猫冠 状病毒(FeCV)、猫合胞体病毒(FeSFV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)均无交叉反应;可检测病毒最小滴度为 5lgTCID50 / mL,相应的 DNA 模板浓度为 4. 9 × 102 拷贝/μL;FPV DNA 在 － 30℃冰箱放置 12 个月仍可检测出目的条带。应用 该方法从 33 份猫临床样本中检测出 21 份 FPV 核酸阳性。结论 建立的 FPV PCR 检测方法具有特异、敏感及稳定 的特点,适合于临床 FPV 的感染检测。     

Pyrococcus sp.DNA聚合酶内蛋白子突变体的剪切性质

将含麦芽糖结合蛋白－嗜热菌ＤＮＡ聚合酶内蛋白子基因的ｐＭＩ８４、ｐＭＩ９４、ｐＭＩ９５三个重组突变体质粒转入Ｅ．ｃｏｌｉ２４２６经发酵及ＩＰＴＧ低温诱导表达,直链淀粉糖亲和纯化获得ＭＩ８４（ｓｅｒ１／Ｓｅｒ５３８Ｓｔｏｐ）、ＭＩ９４（Ｓｅｒ１→ＣｙｓＨ１／Ｓｅｒ５３８Ｓｔｏｐ）、ＭＩ９５（Ｓｅｒ１→Ａｌａ１／Ｓｅｒ５３８Ｓｔｏｐ）三种蛋白质前体。研究了ＰＨ温度、巯基试剂对内蛋白子Ｎ末端的剪切影响。     

859例性病患者PCR检测结果及流行病学分析

目的 :了解本辖区性传播疾病 (STD)中 ,淋球菌 (NG)、沙眼衣原体 (CT)、解脲支原体 (U U)的感染情况及流行趋势。方法 :用聚合酶链反应 (PCR)技术对 85 9例 STD患者的尿道 (宫颈 )拭子标本进行NG、U U及 CT的检测 ,并进行统计学处理。结果 :三种病原体的检出率分别为 U U35 .0 4%、CT2 3.0 5 %、NG15 .0 2 % ,混合感染率以 NG为最高 (2 7.13% ) ,CT次之 (2 1.6 9% ) ,UU最低 (16 .97% )。病原体的检出率明显集中在 19～ 42岁年龄段 ,占全部阳性例数的 90 %。结论 :以 UU、CT为感染源的非淋球性尿道炎 (宫颈炎 )在 STD发病率中呈明显上升趋势 ,19～ 42岁年龄段的患者为主要传染源 ,应作为 STD防治工作中的重点对象     

应用多重的等位基因特异PCR诊断苯丙酮尿症

点突变是导致人类遗传病的主要基因突变类型,其检测方法的探索一直是基因诊断研究中的重要课题。本文报道一种简便、快速检测点突变的新方法——多重的等位基因特异聚合酶链反应(Multiplex allele—specific polymerase chain reaction,MASPCR)。等位基因特异聚合酶链反应(Allele-specific polymerase chain reaction,ASPCR),又     

限制酶SmaⅠ参与的PCR产物克隆技术

介绍了一种增加连接效率的ＰＣＲ产物克隆技术，即ＳｍａⅠ内切酶参与的ＰＣＲ产物与ＳｍａⅠ酶切的载体的连接；并通过克隆黄鲜基因组中一段约２５０ｂｐ的ＰＣＲ产物的实例证实了该技术的可靠有效性。     

普通野生稻中NBS同源序列的克隆和分析

已知的植物抗病基因大多数具有核苷结合位点（NBS）和富含亮氨酸重复（LRR）。根据NBS的保守区设计引物,应用聚合酶链式反应（PCR）,从普通野生稻基因组中克隆了4个不同的NBS同源序列（OSNBA1－OSNBA4）。同源性比较显示它们均与非TIR类的NBS序列相似,其中,OSNBA1与双子叶植物拟南芥的RPS2基因更接近;OSNBA2－OSNBA4与单子叶植物水稻的XA1、RPR1基因更相似。     

小鼠肿瘤致死因子a诱导的TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶6亚单位的相互作用

人类B12蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子a的诱导的蛋白，在小鼠中又称为TNFMP1，其功能尚未见报导．采用蛋白质pull-down、荧光定位和免疫共沉淀分析一系列实验证明小鼠TNFMP1蛋白与DNA聚合酶8的亚单位PSO发生直接相互作用．由此推测TNFAIP1蛋白参与DNA复制过程，并为研究人TNFAIP1基因的功能提供参考．