具有激活RB蛋白生物活性小肽的研究

构建了慢病毒载体表达MP1多肽的RFP融合蛋白(RFP-MP1),并研究了它对人肺腺癌细胞株H1299和人骨髓瘤细胞株U2-OS增殖的影响.U2-OS和H1299细胞中RFPMP1的表达导致了RB在蛋白水平上的积累,使细胞生长受到抑制.此外,细胞流式结果发现RFP-MP1使细胞周期阻滞在G1期.进一步研究表明RFP-MP1能够阻滞RB对E2F活性的抑制.这些结果表明,11肽的MP1能够上调肿瘤细胞中RB蛋白的表达水平并且抑制其生长.     

pEGFP-Egr-1表达质粒构建及其表达抑制HepG2细胞增殖

将RT-PCR扩增的Egr-1基因连接到pMD-18载体上并测序鉴定,经测序正确的Egr-1基因亚克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1上构建成重组质粒pEGFP-Egr-1.重组质粒pEGFP-Egr-1转染HepG2细胞后,运用荧光显微镜及荧光定量PCR技术分析其在HepG2细胞中的表达情况,并进一步运用WST-1法分析其表达对HepG2细胞增殖的影响.结果显示,重组质粒pEGFP-Egr-1构建正确,转染后在荧光显微镜下观察可见HepG2细胞发出绿色荧光信号,荧光定量PCR分析发现转染后HepG2细胞Egr-1基因mRNA水平明显升高.WST-1结果表明,与对照组相比,转染pEGFP-Egr-1质粒的HepG2细胞,其增殖速率明显下降.上述结果表明,pEGFP-Egr-1重组质粒构建成功,外来过表达Egr-1基因能够抑制HepG2细胞增殖.     

外加植物生长调节剂和钙调素对白芷悬浮培养细胞增殖效应的 …

利用＾３Ｈ－ＴｄＲ标记ＤＮＡ合成的方法研究了外加植物生长剂和钙调素对白芷悬浮培养细胞增殖的影响。ＭＳ培养基中有和无植物生长调节剂时,钙调素对细胞增殖的促进效应分别为４１％和４３％。结果表明外加钙调素对细胞增殖的效应与培养介质中的激素浓度可能无关。     

竹节参总皂苷对人肺腺癌A549细胞凋亡和Caspase-3活性的影响

研究竹节参总皂苷对人肺腺癌A549细胞凋亡和Caspase-3活性的影响,选取0.05、0.1、0.2、0.5、1 mg/m L浓度的竹节参总皂苷作用于体外培养的人肺腺癌A549细胞;并设空白对照组,分别作用24、48、72 h后,应用MTT法检测人肺腺癌A549细胞增殖情况。流式细胞术检测人肺腺癌A549细胞凋亡情况,比色法检测竹节参总皂苷作用于人肺腺癌A549细胞48h后Caspase-3活性。不同浓度的竹节参总皂苷对人肺腺癌A549细胞的增殖有显著的抑制作用(P0.05);并呈浓度和时间依赖性。流式细胞术检测结果为竹节参总皂苷可以诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,各浓度组的细胞凋亡率明显高于空白对照组(P0.05);并呈浓度依赖性。说明竹节参总皂苷可抑制人肺腺癌A549细胞增殖和诱导其凋亡。     

北沙参免疫活性多糖制备方法研究

为了确定北沙参免疫活性多糖的最佳制备方法,采用4种方法制备北沙参多糖样品,并进行体外小鼠脾淋巴细胞增殖实验,对各样品进行免疫活性比较。以提取率及体外小鼠脾淋巴细胞增殖率为指标,分析95%乙醇回流除去小分子、除蛋白及不同浓度醇沉等步骤的必要性,确定北沙参免疫活性多糖最佳制备方法。通过提取率及体外小鼠脾淋巴细胞增殖率比较,经沸水提取、浓缩和干燥后获得的北沙参免疫活性多糖样品提取率最高,达33.15%;且该样品对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用最强,在62.5 μg/mL浓度下增殖率达到33.93%。结果显示北沙参免疫活性多糖的最佳制备方法为沸水提取、浓缩并干燥即可,无需进行95%乙醇回流除去小分子、除蛋白及不同浓度醇沉等步骤。     

离子通道、转运载体在癌症演变中的作用

 癌症可以简单地描述为细胞增殖失控。癌症细胞有可能产生在机体中的任何部位,当其在机体蔓延时,往往会导致死亡。离子通道是存在于细胞中的微小蛋白质,它们也同样存在于癌症细胞中。离子通道的活性使得钠、钾、钙、氯等离子可以进出细胞,随着离子交换,细胞内部发生变化,导致多种酶的活性、酸碱度和结构骨架发生改变。     

DADS对人小细胞肺癌细胞株NCI—H446增殖的影响

目的探讨二烯丙基二硫（diallyldisulfide,DADS）体外抑制人肺癌细胞株NCI—H446细胞增殖作用。方法采用MTT、细胞计数、细胞活力检测DADS对体外培养的人肺癌H446细胞的抑制增殖作用;倒置显微镜观察DADS对体外培养的人肺癌H446细胞的形态学改变。结果IVIqT结果显示,DADS作用H446细胞后,明显抑制细胞增殖且抑制率呈现浓度时间依赖性关系;细胞计数结果表明,DADS作用H446细胞后其细胞群体倍增时间延长;形态学变化观察,随着DADS浓度递增,细胞逐渐稀疏,数量明显减少。结论DADS对人小细胞肺癌H446细胞株具有抗增殖作用,且与药物浓度及作用时间相关。     

阿司匹林对人慢性粒细胞白血病细胞株K562的生长抑制作用

为研究阿司匹林对人慢性粒细胞白血病细胞株K562生长的影响,采用光学显微镜和Hoechst 33258染色观察阿司匹林处理后细胞的形态和数目变化,显示阿司匹林促进K562细胞的凋亡.MTT法、细胞计数、软琼脂克隆形成实验、FACS和裸鼠成瘤实验在体外和体内检测阿司匹林对K562细胞增殖和存活的影响,发现阿司匹林明显抑制K562细胞的体外增殖和裸鼠体内成瘤能力.Western blot实验分析细胞信号通道下游基因的表达影响,显示β-catenin、STAT5A、PARP和NF-κB p65蛋白的表达量下调,而细胞周期抑制因子p21表达上调.这些结果提示阿司匹林从体外和体内抑制K562细胞的生长,其作用的机制复杂,可能影响β-catenin信号通道、JAK蛋白酪氨酸激酶/STAT5A信号通道、NF-κB信号传导通道和细胞周期的进程.     

IRS1在藻蓝蛋白介导的H460细胞增殖和迁移调控中的作用

藻蓝蛋白来源于海洋藻类,是我国认可的食品着色剂和功能型食品．初期研究表明,藻蓝蛋白处理能抑制人类非小细胞肺癌系H460的体外增殖能力和迁移能力,使得其体外集落形成能力减弱．通过转录组学测序分析进一步探究具体作用机制,从藻蓝蛋白处理前后发生显著变化的基因中,筛选出了一个藻蓝蛋白处理后发生显著下调的基因,即胰岛素受体底物1（irs1）,并通过体外转染siRNA的方法抑制IRS1的表达,来研究其对非小细胞肺癌系H460的增殖和迁移能力的影响．采用MTT法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移,克隆形成实验检测细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞周期分布．结果表明,下调IRS1的表达后,与对照组相比,细胞的生长速率降低,迁移能力、集落形成能力受到抑制,同时使细胞周期被阻滞到G1期．PI3K-AKT信号通路研究表明,藻蓝蛋白处理使得PI3K-AKT信号通路活性受到抑制,下调IRS1的表达使得PI3K-AKT信号通路部分蛋白表达也下调,通路活性受到一定程度抑制．本研究结果表明,藻蓝蛋白抑制非小细胞肺癌系H460体外活性功能的机制,可能与IRS1的表达和PI3K-AKT信号通路的活性有关,这为藻蓝蛋白的调控机制提供了有力的理论基础．      

细胞膜去极化通过激活MAPK信号通路促进原代肌母细胞增殖

细胞膜去极化可促进某些细胞包括肌卫星细胞的增殖,但去极化对于肌母细胞的作用还不清楚.本文通过培养基中高浓度的钾离子(K~+)引发小鼠原代肌母细胞膜的去极化,采用直接计数法评估细胞的增殖能力.结果显示,在K~+浓度为25 mmol/L的培养基中培养24 h后,肌母细胞数量较常规培养基(5 mmol/L K~+)明显增加,但K~+高至50 mmol/L和100 mmol/L时对细胞增殖没有促进作用.通过流式细胞技术进行细胞周期分析显示,25 mmol/L K~+处理使G1期的细胞数量减少,S期的细胞数量增加.免疫荧光染色和Western blot研究发现,25 mmol/L K~+处理后,对肌母细胞的肌分化能力没有影响.进一步研究发现,25 mmol/L K~+明显促进了肌母细胞MAPK信号通路(ERK1/2)的激活,并与其促进细胞增殖的效应相关. MEK1/ERK1/2的两种抑制剂U0126和PD98059均可减弱细胞膜去极化引起的细胞增殖促进效应.综上,研究结果表明细胞膜去极化通过激活MAPK通路促进小鼠原代肌母细胞的增殖.