全文获取类型
收费全文 | 1218篇 |
免费 | 50篇 |
国内免费 | 114篇 |
专业分类
丛书文集 | 47篇 |
教育与普及 | 22篇 |
理论与方法论 | 10篇 |
现状及发展 | 3篇 |
综合类 | 1300篇 |
出版年
2024年 | 2篇 |
2023年 | 14篇 |
2022年 | 17篇 |
2021年 | 23篇 |
2020年 | 22篇 |
2019年 | 22篇 |
2018年 | 14篇 |
2017年 | 19篇 |
2016年 | 27篇 |
2015年 | 32篇 |
2014年 | 43篇 |
2013年 | 47篇 |
2012年 | 55篇 |
2011年 | 79篇 |
2010年 | 68篇 |
2009年 | 84篇 |
2008年 | 91篇 |
2007年 | 87篇 |
2006年 | 65篇 |
2005年 | 65篇 |
2004年 | 66篇 |
2003年 | 56篇 |
2002年 | 59篇 |
2001年 | 67篇 |
2000年 | 39篇 |
1999年 | 38篇 |
1998年 | 49篇 |
1997年 | 12篇 |
1996年 | 18篇 |
1995年 | 14篇 |
1994年 | 15篇 |
1993年 | 18篇 |
1992年 | 14篇 |
1991年 | 13篇 |
1990年 | 16篇 |
1989年 | 8篇 |
1988年 | 2篇 |
1987年 | 1篇 |
1986年 | 1篇 |
排序方式: 共有1382条查询结果,搜索用时 15 毫秒
91.
单核增多性李氏杆菌多克隆抗体的制备及纯化 总被引:2,自引:0,他引:2
采用家兔背部两侧多点皮内基础注射,静脉加强注射,利用饱和硫酸铵(SAS)盐析和G25分析法制备与纯化抗体,制得高纯度、高滴度(1:2560)的多抗,以此作为检测李氏杆菌的诊断试剂。 相似文献
92.
比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG 总被引:1,自引:0,他引:1
优化了免疫磁珠分离法纯化抗血清的实验条件,并与A蛋白亲和层析法比较纯化效果,以求得到一种简便、快速、高效的纯化IgG方法.结果表明:从5只新西兰兔获得210 mL试管凝集效价高达1∶5 120的兔抗鳗弧菌抗血清,磁珠与IgG结合10 min达到平衡,其最大结合量为0.227 mg/mL;免疫磁珠分离法与A蛋白亲和层析法... 相似文献
93.
为研究环境化合物与雌激素受体的相互作用,在大肠杆菌中异源表达了人雌激素受体ERβ的配体结合区(hERβ-LBD)蛋白。在诱导剂(IPTG)浓度为0.2mmol.L-1,培养温度25℃,诱导时间为8h的优化表达条件下,经亲和色谱法纯化后,hERβ(LBD蛋白的产量可达236mg.L-1. 相似文献
94.
葛属植物基因组DNA的提取和纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
采用SDS裂解法提取了葛属植物成熟叶片的基因组DNA,并利用凝胶纯化试剂盒进行了纯化。结果表明,该纯化方法有效,所获得的DNA可用于PCR反应。 相似文献
95.
96.
以总黄酮含量和转移率为评价指标,采用多种方法提取纯化华中枸骨叶总黄酮(ICTF),并以TNF-α诱导人关节滑膜成纤维细胞MH7A为滑膜炎症细胞模型评价其抗RA滑膜炎症活性,试剂盒测定炎症介质NO含量,RT-qPCR检测炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8mRNA的转录水平.结果表明,华中枸骨叶乙醇总提取物经石油醚脱脂... 相似文献
97.
膜纯化—分光光度法测定侧柏叶总黄酮含量 总被引:2,自引:1,他引:2
将膜分离技术与植物有效成分分析方法结合,提出以二醋酸纤维素膜(CAMFM)膜纯化-分光光度法取代蒸干转溶法测定侧柏叶提取液中侧柏叶总黄酮含量。与蒸干转溶法相比,CAMFM膜纯化-分光光度法具有除杂效率高、分析过程无相变、有效成分理化性质稳定、分析操作简便、分析结果重复性好、准确度较高的特点。 相似文献
98.
镍离子亲和层析介质的制备及其用于组氨酸标记蛋白质的纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
以交联琼脂糖微球为基质,通过环氧氯丙烷活化,偶联亚胺二乙酸并螯合Ni2+,制备得到一种镍离子亲和层析介质.结果发现,在强碱条件下环氧活化率达到了38.0 μmol/mL,最终Ni2+配基密度达到了30.9 μmol/mL,偶联效率为81.3%.利用得到的镍离子亲和介质对基因工程大肠杆菌表达的组氨酸标记3-羟基丁酮还原酶进行了一步层析纯化,酶活回收率达到了58.8%,纯化倍数为2.1,蛋白纯度在85%左右,纯化效果与常用商品介质基本相当. 相似文献
99.
鲤鱼红色肉中金属蛋白酶的分离纯化与性质分析 总被引:1,自引:0,他引:1
通过硫酸铵盐析、DEAE—Sephacel离子交换、Sephacryl S-200凝胶过滤、High-Q离子交换和Gelatin—Sepharose亲和层析等方法,从鲤鱼红色肉中纯化得到分子量为75ku的金属蛋白酶.该酶在碱性条件下显示活性,活性温度范围为30~50℃.金属蛋白酶抑制剂EDTA和EGTA能够完全抑制该酶的活性,而其他蛋白酶类抑制剂则不起抑制作用.进一步研究发现,该酶能够有效分解Ⅰ型胶原蛋白和明胶,说明其在鱼体死后肌肉软化过程中起着重要作用. 相似文献
100.
从接骨草幼叶中提取的蔗糖酶粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化,得到3种同工酶.对3种同工酶进行SDS-PAGE和IEF电泳均显示一条蛋白带,其亚基分子量分别为45.8KD,44.3KD,43.2KD;等电点分别为pH4.0,pH3.8,pH3.75.凝胶过滤测得3种同工酶全酶分子量分别为91.2KD,89.1KD,87.4KD,表明3种同工酶均由2个相同亚基组成,其表观Km分别为30mmol/L,57.1mmol/L,65mmol/L;Vmax分别为98μg/min,48μg/min,35μg/min.同工酶Ⅰ和同工酶Ⅲ在pH4.4~5.0时有最大活性,同工酶Ⅱ则在pH3.9~4.2时有最大活性.3种同工酶均在pH3-6范围内比较稳定.同工酶Ⅰ和同工酶Ⅱ在48~52℃有最大活性,同工酶Ⅲ在50~55℃有最大活性.3种同工酶均在50℃以下有较好的稳定性. 相似文献