全缘叶蓝刺头化学成分研究

研究了全缘叶蓝刺头(Echinops integrifolius Kar.et Kir.)根的化学成分.采用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱、半制备HPLC、制备薄层色谱及重结晶等技术手段进行分离纯化,通过理化性质、核磁共振波谱及质谱数据鉴定结构.结果从全缘叶蓝刺头根乙醇提取物的石油醚萃取部位及乙酸乙酯萃取部位分离得到7个化合物,分别鉴定为大黄素甲醚(1)、(+)-11α,13-二氢去氢木香内酯(2)、豆甾醇(3)、7-羟基香豆素(4)、东莨菪素(5)、对羟基苯甲酸(6)和茵芋苷(7),其中化合物6是首次从该植物中分离得到,化合物1、2、5和7是首次从蓝刺头属中分离得到.     

以壳聚糖为基质对蚯蚓纤溶酶进行亲和层析

蚯蚓纤溶酶(Earthworm fibrinolytic enzymes)有多种同工酶,分离纯化相对比较困难.我们采用壳聚糖作为基质,大豆胰蛋白酶抑制剂为配体,戊二醛为偶联剂,分别研究了酸性和碱性条件下对蚯蚓纤溶酶的纯化效果.实验表明经壳聚糖为载体所制备的亲和吸附剂对蚓激酶具有较高的分离纯化选择性.并且在酸性条件下提取比在碱性条件下提取所得同工酶要少.     

淫羊藿中有效成分淫羊藿甙分离纯化的研究

在Tween80-(NH4)2SO4液-固萃取体系中,试验了淫羊藿甙在两相的分配行为.选择Tween80浓度为9%,(NH4)2SO4浓度为1.667mol/L,萃取pH4.20,淫羊藿甙的一次萃取率可达95.2%.选择(NH4)2SO4浓度为2.121mol/L,反萃pH10.30,经一次反萃,可使94.2%的淫羊藿甙与Tween80分离.用HPLC对分离效果作了评价,结果表明,该萃取体系对淫羊藿粗提液有明显的分离纯化作用.     

小麦幼叶中小G蛋白的粗分离

对小麦幼苗叶片中的蛋白进行了粗提,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测在20.1 KDa～31 KDa间呈现一条蛋白条带,经分析其分子量约为23.1 KDa,占所提取总蛋白的2.93%,推测其为小G蛋白家族中的成员.采用传统的硫酸铵盐析法对此目的蛋白进行粗分离.结果显示,30%的硫酸铵饱和度可将该蛋白分离,且所含杂蛋白量最少,其纯度和得率分别是22.96%和47.3%,是进一步细分离纯化的较好选择.     

利用有机溶剂法快速纯化绿色荧光蛋白

介绍非色谱GFP纯化方法——有机溶剂纯化法．该方法在短时间内（30min）即可获得大量较高纯度（91．7％）,且荧光光谱特征不改变的GFP蛋白．纯化过程简单,无需昂贵的仪器和设备,适合绝大多数中小实验室使用．     

赤子爱胜蚓(Eisenia Foelide)纤维素酶的初步研究

将赤子爱胜蚓整体组织匀浆的抽提液,经Sephadex G-75凝胶过滤、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换及在FPLC仪上用Mono Q柱分离,可以纯化到多种组分的纤维素酶,研究了它们的酶学性质,证明均为C_X酶。     

比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG

优化了免疫磁珠分离法纯化抗血清的实验条件,并与A蛋白亲和层析法比较纯化效果,以求得到一种简便、快速、高效的纯化IgG方法.结果表明:从5只新西兰兔获得210 mL试管凝集效价高达1∶5 120的兔抗鳗弧菌抗血清,磁珠与IgG结合10 min达到平衡,其最大结合量为0.227 mg/mL;免疫磁珠分离法与A蛋白亲和层析法...     

人酸性成纤维细胞生长因子的高效表达

构建能高效表达人酸性成纤维细胞生长因子（haFGF)的基因工程菌,优化产物分离纯化条件,并对纯化产物进行理化性质鉴定,采用PCR方法扩增haFGF cDNA,将该cDNA片段插入表达载体pET3c的表达框架中,筛选得到了重组质粒pET3c-haFGF,转化大肠杆菌BL21（DE3）,构建了表达菌件BL21（DE3）／pET3c-haFGF.IPTG诱导表达,通过离子交换,肝素亲和两步层析的方法分离纯化产物,用MTT法测定产物的活性,haFGF的表达量约为20％,经过两步层析纯化,获得了电泳纯的haFGF样品,纯化haFGF样品的比活性为ED50小于4.0ng/mL.BL21(DE3)/pET3c表达系统能高效表达haFGF,经过纯化得到了理化性质及生物活性与天然haFGF对照品一致的重组人酸性成纤维细胞生长因子。     

重组类人胶原蛋白Ⅰ的层析分离

目的研究重组类人胶原蛋白的基因工程下游工艺对阴离子交换树脂（DE52）和阳离子交换树脂（CM52）的吸附效果。方法将基因工程菌E．coil BL 21经超声破碎、硫酸铵盐析、超滤浓缩后，再进行批量层析进一步分离纯化。结果得到最佳实验条件：采用阴离子交换树脂，pH值为6．0。盐浓度为0．2mol／L，蛋白进样浓度为0．4％（质量分数）。结论在HCBI的纯化过程中，阴离子交换树脂（DE52）较阳离子交换树脂（CM52）的分离效果更优，最终产物的纯度达到95．98％，回收率为91．7％，纯化倍数为5．3。纯化的类人胶原蛋白Ⅰ经SDS—PAGE电泳测定为电泳纯，分子质量为90ku。     

双孢蘑菇子实体超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及部分性质

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析、Sephadex G-150分子筛柱层析分离纯化了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)子实体超氧化物歧化酶.纯化了31倍,回收率为10.51%,纯酶比活力为5 512.6 u/mg,酶的最适作用温度为25 ℃,最适pH值为8.0,酶在25 ℃以下比较稳定,亚基分子质量为21 kD,全酶分子质量为43 kD, 该酶由2个相同的亚基组成.