人β地中海贫血β41/42突变基因的克隆和真核表达体系的构建

目的: 克隆人地中海贫血基因β41/42及调控系列LCR,构建该致病基因的体外真核表达体系,为该病基因治疗的研究提供理想模型.方法:抽提β41/42纯合子患者的DNA,PCR扩增出人β珠蛋白基因座控制区(LCR)和β41/42基因,将其串连克隆至真核稳定表达质粒pcDNA3.1-中,脂质体转染至小鼠红白血病细胞(MEL),DMSO诱导MEL细胞表达,逆转录PCR检测人β41/42基因在MEL中的表达.结果: 成功构建了人β41/42突变基因的真核表达系统.结论:β41/42基因在MEL细胞中的表达情况与设计的表达完全一致,为该病的基因治疗研究提供了一个理想模型.     

Abd-Bcr/Abl原核表达载体的构建和表达

构建Bcr/Abl-Abd原核表达载体,并表达、观察对白血病细胞K562的影响.以慢性白血病PGD210质粒为模板,应用聚合酶链反应(PCR)扩增出Abd编码区序列,克隆入pMD18t载体,经酶切测序鉴定正确.再通过酶切重组克隆入原核表达载体pET32a,构建pET32a-Abd重组表达质粒,经酶切、测序鉴定,序列、读码框均正确.通过转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,纯化.结果PCR扩增出特异性的501bp的目的片断,以此构建的重组质粒pET32a-Abd能够在上清中表达约36.6 kd的目的蛋白,Westem blot鉴定为特异表达.证明成功构建了原核表达载体pE732a-Abd,并表达在上清中,表达蛋白约占菌体总蛋白的6%,纯化后达到74.3%,Westem blot检测为特异性表达,为进一步研究该蛋白对慢性白血病细胞的作用奠定了分子基础.     

EAA方案治疗难治性及复发性急性白血病疗效观察

目的 探讨难治性急性白血病(AL)的治疗方法.方法 采用安吖啶(AMSA)、阿糖胞苷(Am-c)、依托泊苷(Vp16)组成的EAA方案治疗38例难治性复发性AL并观察疗效.结果 38例病人完全缓解15例,部分缓解10例,总有效率65%.结论 EAA方案是治疗难治性复发性AL有效的方法.     

血小板输注疗效影响因素探究及其与预后的关系

目的:研究影响急性白血病患者血小板输注疗效的相关因素,探究输注疗效对患者预后的影响.方法:对中山大学附属第一医院血液内科113例急性白血病(AL)患者预防性输注的1 921次血小板的影响因素进行分类分析,并依据血小板增加指数值(CCI),将患者分为血小板输注有效组和无效组,对无效组及有效组患者进行预后分析.结果:血小板输注疗效与患者起病时的血象、脾脏大小有关,而与患者的年龄、性别、血型、疾病类型等并无统计学差异.无效组患者死亡率(45.2%)高于有效组患者(25.8%),且有统计学差异(P<0.05).急性淋巴细胞白血病(ALL)患者无效组中位生存期(10.4月)远低于有效组(17.2月),具有统计学差异(P<0.05),急性髓系白血病(AML)患者无效组及有效组中位生存期均未到达,两组无统计学差异(P>0.05).结论:起病时伴有贫血(血红蛋白质量浓度<60 g/L)、血小板降低(血小板计数<20×10⁹/L)、白细胞升高(白细胞计数>50×10⁹/L)等血象异常的急性白血病患者更易发生血小板输注无效,血...     

慢性中性粒细胞白血病1例并文献复习

慢性中性粒细胞白血病(CNL)是一种BCR-ABL融合基因阴性的骨髓增殖性疾病,以外周血成熟中性粒细胞异常急剧升高和脾脏肿大为其特征,临床表现多为腹胀、纳差、体重减轻、皮肤瘀斑、夜间盗汗,少数患者有肝脏和淋巴结肿大.其诊断主要依据分子生物学检查,最具有意义的是CSF3R基因突变.CNL发病罕见,目前无特异性治疗,多给予...