由标准强毒F114株全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒

通过RT-PCR获得猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)强毒株cF114株(中国标准强毒F114株经PK-15细胞增殖)全长基因组cDNA并测序. 与已知其他几株CSFV代表毒株F114, Brescia, Alfort和C株的核苷酸同源性分别为99.41%, 96.80%, 86.03%和95.70%; 氨基酸同源性分别为99.28%, 98.54%, 93.33%和97.41%. 将获得的各基因片段按病毒基因组顺序连接成全长cDNA, 插入pMC18质粒SalⅠ/ XbaⅠ之间, 得到含病毒全长基因组的重组质粒pMC12297. 用T7 RNA聚合酶进行体外转录, 转录出的RNA转染PK-15细胞, 细胞上清液经扩增后, 测定上清液中病毒滴度. 质粒来源的CSFV(vM12297)在抗原反应性和复制能力方面与父代病毒相似. 将疫苗毒C株囊膜蛋白基因E01和E2分别替换到pMC12297相应位置, 获得嵌合体基因组质粒pM/CE01和pM/CE2, 体外恢复获得嵌合体病毒vM/CE01和vM/CE2. 两种嵌合体病毒均能感染PK-15, SK-6和原代猪睾丸细胞, 间接免疫荧光检测显示较vM12297弱, 在PK-15细胞上滴度达到8×10 F-PFU/mL. 这一工作为进一步研究和探讨CSFV增殖与致弱的机理提供了重要的实验和理论资料.     

猪瘟、仔猪副伤寒并发感染的诊治

<正> 猪瘟、仔猪副伤寒是目前危害我国养猪业的大敌,是一种急性败血性传染病,传染性强,致死率高,一旦有继发感染时,可以给养猪户造成极为严重的经济损失,目前猪瘟、仔猪副伤寒在我国广大散养户农户已得到基本控制。病例,经分析发现某种猪场发生了猪瘟、仔猪副伤寒是由于免疫不确定,我地近     

补中益气散对猪瘟疫苗免疫效果的影响

为了进一步提高猪瘟疫苗的免疫效果,探讨补中益气散对该疫苗的免疫增强作用,该研究以某猪场27头30日龄健康仔猪随机分为3组,对照组和试验1,2组.对照组仅注射猪瘟疫苗;试验1组用补中益气散拌料饲喂一周后注射疫苗;试验2组注射疫苗同时拌料饲喂补中益气散一周,中药用量均按0.2%加入饲料.分别于免疫当天、免疫接种后7,30d无菌操作采集血样,运用正向间接血凝试验检测血清中的抗体水平.结果表明:补中益气散可显著提高血清中的抗体水平,免疫后30d免疫保护率维持在88.9%以上,提示补中益气散具有显著增强猪瘟疫苗免疫效果的作用.     

Sequencing and rescuing a highly virulent classical swine fever virus： Chinese strain cF114 from a full-length cDNA clone

Classical swine fever is an economically important, highly contagious disease of pigs caused by the classical swine fever virus (CSFV), as referred to as hog cholera virus. CSFV belongs to Pestivirus within the family of Flaviviridae. The virus contains a positivestranded RNA of approximately 12.3 kb in length[1]. The genome is composed of a 5′ non-coding region, a single large open reading frame (ORF) encoding the viral polyprotein with 3898 amino acid residues and a 3′ non-coding reg…     

IL—2与猪瘟病毒E2基因真核双表达载体的构建及其免疫增强作用的研究

应用DNA重组技术构建了猪瘟病毒E2基因与IL－2基因的双表达真核表达载体,观察其表达水平,并对其免疫增强效果进行了观察,结果是构建了猪瘟病毒E2基因与白细胞介素－2的真核表达质粒pIRST IL-2。将质粒转染BHK－21细胞,可在体外表达E2和有生物活性IL－2,pIRST IL-2质粒能诱导产生CSFV的特性免疫反应,pIRST IL-2所诱导的免疫应答反应比使用单表达质粒pIRST强,实验表明,IL－2与猪瘟病毒E2基因构建的双表达基因疫苗能有效提高基因疫苗的免疫效果。     

猪瘟病毒石门株全基因组cDNA文库构建、序列测定及分析

根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了 1 8对覆盖全长基因组的引物 .应用RT PCR技术从猪瘟病毒石门株感染的猪血中扩增出各相应的cDNA片段 ,分别克隆 ,构建了石门株全基因组的cDNA文库并完成了序列测定 .石门株基因组全长 1 2 2 98nt,其中 5′端和 3′端非编码区长度分别为 373和 2 31nt,中间一个大的开放阅读框长 1 1 6 97nt,翻译成一个包含3898个氨基酸残基的多聚蛋白 .还对石门株序列与其他猪瘟病毒序列进行了分析比较     

猪瘟强毒株与兔化弱毒疫苗株的LAMP鉴别检测

为了鉴别猪瘟病毒（CSFV）野毒感染和疫苗接种,系统比较分析CSFV标准强毒株、疫苗株、不同基因亚型的野毒株的全基因组序列差异,设计一套分别针对猪瘟强毒与弱毒NS5B基因的环介导等温扩增（LAMP）引物,建立特异性的猪瘟强毒株与疫苗株的LAMP检测方法.LAMP扩增产物用罗丹明B指示剂或者琼脂糖凝胶电泳进行检测.该方法特异性好,比RT-PCR灵敏度高出1 000倍,且重复性稳定性良好,为快速准确地鉴别CSFV野毒感染和疫苗接种提供了有效的方法.     

ELISA 抗原检测与荧光 RT-PCR快速诊断猪瘟的比较研究

为找出临床上猪瘟快速、有效的诊断方法,对荣昌县2个猪场出现的40头临床症状疑似猪瘟的病猪进行病理剖检,结果证实有8头病猪出现猪瘟典型症状.采集40头病猪的血样,进行ELISA猪瘟抗原检测和荧光RTPCR猪瘟核酸检测,结果显示ELISA抗原检测检出7份血样为猪瘟抗原阳性,阳性检出率为87.5%;荧光RTPCR核酸检测出4份血样为阳性,阳性检出率为50%.该结果证实,ELISA猪瘟抗原检测的阳性检出率比荧光RT-PCR核酸检测更高,建议临床上采用ELISA抗原检测的方法进行猪瘟的快速诊断.     

兽用疫苗应用中的误区

通过注射疫苗预防某些疫病是养殖业一项很重要的工作。笔者在基层工作，发现一些养殖户在采用疫苗预防疾病方面存在一些认识上的误区。 误区一：进口疫苗比国产疫苗好这种想法是片面的。例如：预防猪瘟用的猪瘟兔化弱毒国产疫苗，     

猪瘟弱毒苗注射奶犊牛的E玫瑰花环试验

本实验用E玫瑰花环试验检测奶犊牛的细胞免疫状况,实验组8头奶犊牛注射疫苗前的E玫瑰花环率平均为20%,注射疫苗后第45天E玫瑰花环率平均为26%,而对照组5头犊牛E玫瑰花环率平均为22%,数据显示注射疫苗后比注射疫苗前上升了6%,比对照组上升了4%.实验结果表明犊奶牛注射猪瘟弱毒苗后能够引起细胞免疫的提高.