螺旋藻基因组DNA制备方法的摸索与比较

为了得到高质量的螺旋藻基因组DNA,采用超声波法和溶菌酶法两种方法提取基因组DNA,并对实验方法进行了摸索与比较。结果表明:影响螺旋藻基因组DNA制备质量和得率的重要因素之一是螺旋藻细胞壁的破壁程度。本实验中采用两种破壁方法均可得到高质量高得率的螺旋藻基因组DNA,但超声波法破壁不易掌控,而适当浓度的溶菌酶法可获得较理想的结果。     

壳聚糖与溶菌酶复配体系的杀菌性能研究

采用对倍稀释法测定壳聚糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并用定量法测定壳聚糖与溶菌酶复合体系的杀菌率,与单一成分的壳聚糖或溶菌酶进行对比,最后考察了壳聚糖和溶菌酶复合体系的稳定性,并对其抑菌机理进行初步研究。结果表明:2g/L壳聚糖虽然对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌有一定的杀菌率,但对白色念珠菌的杀菌率还不到50%,而溶菌酶质量浓度在5～20g/L对受试菌无明显抑菌作用。将2g/L壳聚糖和10g/L溶菌酶复配后,对受试菌的杀菌率优于单独使用壳聚糖或单独使用溶菌酶,尤其是对白色念珠菌的杀菌力明显提高;将复配液样品置于54℃恒温箱内14d,杀菌率略有降低,但仍然保持在90%以上,说明复配体系稳定性良好。     

溶菌酶结晶的研究进展

溶菌酶作为一种重要的模型蛋白被广泛应用于蛋白质结晶机理和方法的研究.概括了溶菌酶的结构、性质及应用,总结了溶菌酶的常用结晶方法,探讨了近年出现的新的结晶方法,介绍了结晶条件、结晶机理及主要的观测方法,展望了溶菌酶结晶过程的发展前景.     

巴斯德毕赤酵母发酵生产重组人溶菌酶

对巴斯德毕赤酵母GS115菌株在工业培养基中发酵和分离条件进行了研究。结果表明：将传统工业培养基中碳源和氮源的质量浓度分别降低至35 g/L和5 g/L时,酵母生长期的细胞密度与传统培养基的相差不大,但培养时间可减少4 h,节省了生产成本;维持诱导期间的pH值为4.0对目标蛋白的表达最有利,目标蛋白的表达量占酵母分泌蛋白总量的70％,比原来增加了近30％;分离纯化过程,采用将强阳离子（SPFF）与弱阴离子（DEAE）交换层析柱偶联的分离方法,达到除杂,并浓缩目标蛋白的作用,目标蛋白产量约为50 mg/L;将目标蛋白酶切后,质量酶活性为8.56×10-3 mol/(s•g)。     

溶菌酶水溶液的激光拉曼谱

本文报道了溶菌酶水溶液的激光拉曼谱。酰胺Ⅰ振动谱带在1657cm~(-1),酰胺Ⅱ振动谱带在1302和1253cm~(-1),酪氨酸残基的特征谱带在854和837cm~(-1)。硫—硫桥键的振动谱带在505cm~(-1)。并由此定性地证明了该蛋白质分子的肽链主要由α—螺旋和无规则卷曲组成,酪氨酸残基在分子中呈三分之二“暴露”式,硫—硫键部位的几何构型为扭式—扭式—扭式。     

利用体细胞核移植技术生产表达增强绿色荧光蛋白（EGFP）的转人溶菌酶基因（HLY）的 猪克隆胚胎

由于生理特性和器官大小的原因,猪在人类疾病模型和器官移植方面具有很大的应用潜力.正因如此,猪基因结构的修饰对农业生产和人类医学两方面都意义重大.研究用脂质体介导的方法转染了猪胎儿成纤维细胞,所用结构为双标的人溶菌酶质粒(pBC1-HLY-GFP-NEO).分别对包含两个品种（五指山猪、长白猪）的5个细胞系（sw7,sw8,slw3,slw6和slw9）进行了转染.经过14d,1000μg/mL浓度G418药物的筛选处理,sw7,sw8,slw3和slw6等4个细胞系的95%以上细胞都表达绿色荧光蛋白,而细胞系slw9的转染效率只有49.3%.用转染效率高的3个细胞系作为核供体构建猪克隆胚胎,通过电刺激方法进行融合和激活,然后在PZM3中体外培养.48h后,重构胚的平均卵裂率为76.7%;经过7d培养后观察,有18.5%的胚胎发育到囊胚阶段,其中93.3%的囊胚在荧光显微镜下能够发出绿色荧光,但囊胚之间的荧光强度存在差异.研究结果表明,通过脂质体介导的方法可以获得高转染效率的转基因猪胎儿成纤维细胞系,但细胞系之间的转染效率不同;用转基因猪胎儿成纤维细胞构建的重构胚,能够成功发育到囊胚阶段,而且大多数为表达绿色荧光蛋白的阳性胚胎.     

鱼类溶菌酶和组织蛋白酶研究进展

溶菌酶和组织蛋白酶在鱼类先天性免疫系统中发挥重要作用。溶菌酶是一种具有生物活性的、能水解粘多糖的无毒、无公害小分子碱性酶,参与机体多种免疫反应,在抵抗外来病原细菌、真菌、病毒或肿瘤入侵中起重要作用。组织蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员,参与机体的多种生理和病理活动,目前在细胞凋亡中的作用日益受到重视。本综述主要介绍近年来鱼类溶菌酶和组织蛋白酶在生物学功能、基因克隆、组织分布及重组蛋白功能活性的新研究进展。     

荧光光谱法研究壳聚糖与溶菌酶的相互作用

采用荧光光谱法研究了在pH=6.3的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲体系中壳聚糖与溶菌酶的相互作用。实验结果表明,壳聚糖对溶菌酶的荧光猝灭为静态猝灭和动态猝灭同时发生的复合猝灭,测定了不同温度下的猝灭常数。由热力学参数方程,推断出壳聚糖与溶菌酶之间的作用力主要来自疏水作用力和静电引力。运用Fster非辐射能量转移原理,计算了壳聚糖与溶菌酶色氨酸残基间的距离为1.47 nm。     

溶菌酶的应用进展

介绍了溶菌酶的生物学价值、在各领域中的应用,并对利用溶菌酶时存在的问题进行了分析,最后对溶菌酶的应用前景进行了展望.     

水温对鱼类免疫活动的影响

温度是一种非常重要的非生物因子,会影响鱼类正常的生理活动及行为特征.鱼类的免疫活动对环境温度的变化十分敏感,但不同鱼类调节其免疫活动的规律各有特点.概而言之,水体温度变化主要影响了鱼类抗体分泌、免疫活性细胞的活性及数量、溶菌酶活性及补体活化途径及活性.超过鱼类生理适应范围的温度都会抑制其特异性和非特异性免疫活动.适宜的...