溶菌酶与顺铂联合应用对肝癌SMMC-7721细胞的协同抑制效应

目的: 探讨溶菌酶(lysozyme,Ly)和顺铂(cisplatin,Cis)对肝癌细胞SMMC-7721生长的协同抑制效应及其抑制机制,并分析Ly对正常肝细胞LO2的毒性作用.方法:分别用MTT比色法和RT-PCR 观察Ly与Cis联合应用对SMMC-7721细胞生长的抑制作用以及对PCNA、bcl-2的mRNA 表达水平的影响,同时测定Ly对LO2细胞生长的毒性作用.流式细胞仪观察Ly与Cis联合应用对SMMC-7721细胞诱导凋亡的作用. 结果:Ly能有效地协同Cis抑制SMMC-7721细胞生长,抑制率最低36%,最高82%,呈时间、剂量依赖性关系,但在同样浓度下对LO2细胞几乎没有抑制作用.联合用药组的PCNA、bcl-2的mRNA的表达水平均比对照组明显降低.流式细胞仪分析显示,Ly协同Cis作用可诱导SMMC-7721细胞凋亡,最高凋亡率为32.5%.结论:溶菌酶 (Ly)能有效地协同Cis抑制SMMC-7721细胞增生并促进其凋亡,其机制可能与Ly协同Cis降低PCNA和bcl-2的mRNA表达有关.     

基于金纳米和适配体的表面等离子体共振技术检测溶菌酶

首先建立了一种基于表面等离子体共振技术的适配体传感器检测溶菌酶.通过自组装的方法将1,4-苯二硫醇连接于芯片表面,将组装好的芯片用金纳米修饰,最后将溶菌酶适配体固定到修饰好的芯片上.结果表明,在0.2～20 μmol/L范围内具有良好的线性关系,线性方程为Y=41.81+3.60 X,检出限为0.09μmol/L.对人血清样品检测,平均回收率为92.9％～99.6％.     

溶菌酶的性质与应用

主要介绍了溶菌酶的结构、性质以及在实际生活、生产中的应用概况.溶菌酶又称N-乙酰胞壁质聚糖水解酶或胞壁质酶,广泛存在于生物体内,它是一种专门作用于某种目的微生物细胞壁的糖苷水解酶,是一种天然的、无毒的、无害的、安全性很高的蛋白酶,被广泛应用于医药制剂、食品、饲料、生物研究等行业.     

利用基因表达谱芯片研究东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫前后基因的差异性表达

利用大、小鼠基因表达谱芯片分别研究了Balb/c小鼠感染日本血吸虫7d时肺组织、东方田鼠感染日本血吸虫7d时肺组织、12d时的肺和肝组织基因差异表达方式.结果表明,小鼠感染日本血吸虫7d时肺丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor) 基因表达上调,同时没有免疫相关基因的表达变化;与之相反,东方田鼠感染日本血吸虫7d 时肺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因没有表达变化,非特异性免疫相关基因,如溶菌酶(Lysozym e) 和各类组织蛋白酶(Cathepsin)基因表达上调,而且肺内特异性免疫相关基因如CD74、MHC Ⅱ和MHC Ⅰ等表达上调.这一现象得到东方田鼠感染日本血吸虫12d时肺和肝中特异性免疫和非特异性免疫相关基因的上调表达的进一步证实.而且,东方田鼠感染日本血吸虫12d时肺中丝氨酸蛋白酶抑制剂基因表达下调,肝组织中胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor 1,IGF 1)基因表达下调.提示日本血吸虫适宜性宿主小鼠和非适宜性宿主东方田鼠感染日本血吸虫前后两者有相反的基因表达方式.东方田鼠抗日本血吸虫机制可能包括免疫防御机制和阻止虫体获得宿主源促生长发育物质机制.     

鸡蛋清中提取溶菌酶方法的研究

溶菌酶是一种有效的抗菌剂,全称为1,4-β-N-溶菌酶．因其对人体细胞没有毒性作用,故在医学、食品科学等领域广泛应用．蛋清中溶菌酶的含量约2‰,但杂蛋白的含量很高,使得在制取高纯度溶菌酶时操作比较复杂,成本较高．本介绍的方法操作简便,成本低,收率高．     

还原变性的溶菌酶的体积排阻色谱复性

探讨二次体积排阻色谱在非氧化还原平衡体系及中性条件下对还原变性的溶菌酶(Lys)的复性.结果表明:在初次排阻色谱的溶菌酶洗脱液中加入过量的氧化型谷胱苷肽(GSSG)和盐酸胍(GuHCI)充分作用后,进行二次体积排阻色谱能够成功复性还原变性的溶菌酶.     

溶菌酶标准酶活曲线测定方法的改进

天然溶菌酶活性（标准酶活）的测定是蛋白质复性研究过程中的一个关键步骤。为了增加测定数据的准确性和可比性,改进了测定标准酶活的方法。在固定其他条件的前提下,对于影响标准酶活的重要因素-温度,采用空调控制室温的方法,使其规律性由低到高变化。同时将测活液放置在与所控制室温相同的水浴环境中保持温度,测出各种温度下曲线的斜率,用直线进行拟合。对于其他没有测定的温度点,可以从拟合曲线中求出。这样,通过一组实验便可以得到任意温度下的标准酶活。     

溶菌酶标准酶活曲线测定方法的改进

天然溶菌酶活性(标准酶活)的测定是蛋白质复性研究过程中的一个关键步骤.为了增加测定数据的准确性和可比性,改进了测定标准酶活的方法.在固定其他条件的前提下,对于影响标准酶活的重要因素-温度,采用空调控制室温的方法,使其规律性由低到高变化.同时将测活液放置在与所控制室温相同的水浴环境中保持温度,测出各种温度下曲线的斜率,用直线进行拟合.对于其他没有测定的温度点,可以从拟合曲线中求出.这样,通过一组实验便可以得到任意温度下的标准酶活.     

XeCl准分子激光辐照能量变化对溶菌酶结构与活力的影响

采用XeCl准分子激光器,以不同能量密度激光(0.1 mJ/mm2,0.3 mJ/mm2,0.5 mJ/mm2)辐照溶菌酶,研究辐照后酶活力和蛋白质结构变化。以SDS-PAGE方法检测酶分子间聚合情况,并结合荧光光谱、圆二色光谱变化,探讨不同能量密度激光辐照对溶菌酶活力和分子结构变化规律。结果表明,较低能量密度(0.1 mJ/mm2,0.3 mJ/mm2)辐照,溶菌酶的荧光光强和酶活力随着辐照剂量(脉冲数)的增加出现先上升后下降的规律变化,而较高能量激光辐照(0.5 mJ/mm2)导致溶菌酶活力和荧光光强均呈下降趋势,这说明激光辐照导致的溶菌酶活力和分子结构变化存在剂量依赖效应。SDS-PAGE显示,随着辐照能量密度和脉冲数的增加,溶菌酶出现了更多的分子间聚合。较低能量密度辐照时,聚合是由分子间二硫键形成的,而较高能量密度诱发的分子聚合是由分子间二硫键及疏水键协同作用形成的。圆二色光谱分析显示,激光辐照使溶菌酶分子内α螺旋和转角的含量均呈现不同程度下降,β-折叠和无序的氨基酸无规则卷曲的比例均有升高,这说明溶菌酶活力的降低及分子聚合是由溶菌酶分子二级结构改变造成的。     

不同pH值的酸处理溶菌酶溶液的拉曼光谱分析

分析了pH 5.0到pH 1.0的溶菌酶溶液的激光拉曼谱,酰胺Ⅰ振动谱带分别出现在1660、1656、1657、1660和1655 cm^-1,酰胺Ⅲ振动谱带分别出现在1255、1257、1263、1261、1260 cm^-1和1301、1302、1302、1302、1301 cm^-1,并计算了它们相对强度的变化.由此定性可知,该蛋白质分子的肽链主要由α-螺旋和无规则卷曲组成.在酸化的过程中,溶菌酶的构象基本一直保持稳定,但当pH＜2.0时,该溶菌酶开始变性.在pH=5.0时酪氨酸为“暴露式”,当pH=4.0-2.0时为“埋藏式”,而到了pH=1.0时酪氨酸的双峰已基本消失了.色氨酸的1361 cm^-1的强度随酸性的增强而减弱,由“埋藏式”逐渐转化为“暴露式”.硫-硫桥键的振动谱带按pH5.0到pH1.0的顺序分别在508、508、507、507和509cm^-1,且强度基本不变,表明在酸环境中,硫-硫键部位的几何构型都是扭曲-扭曲-扭曲,pH值的改变对几何构型无影响.