胞内共生菌Wolbachia内噬菌体相关尾蛋白基因的分子克隆及特征分析

Wolbachia是一种广泛存在于各种节肢动物体内经母系细胞质遗传的胞内共生菌。它能够改变宿主的生殖和发育行为，引起细胞质不亲和（cytoplasmic incompatibility,CI)、孤雌生殖、雌性化和雄性致死等现象，但是其间的分子生物学机理迄今尚不清楚。采用RDA（representational difference analysis,代表性差异分析）和LM－PCR（ligation-mediated PCR)等方法，通过研究Wolbachia不同品系基因组之间的差异，从来自果蝇Drosophila melanogaster CantonS的Wolbachia(wMelCS)中克隆到了噬菌体相关尾蛋白基因prtp(phage-related tail protein)，同时从果蝇Drosophila melanogaster yw67c23中的Wolbachia(wMel)中克隆到了同源基因。通过研究prtp在不同Wolbachia品系间的表达，发现PrTP可能不直接参与CI过程。体外果蝇S2细胞的瞬时转染实验结果证明了prtp基因内双向核定位序列（bipartite nuclear localization signal sequence,NLS)的功能，prtp基因的存在为噬菌体介导的基因水平转移（horizontal gene transfer,HGT)提供了直接证据，并提示其在Wolbachia的生殖特性中可能扮演重要的角色。     

分子标记鉴定红莲型细胞质雄性不育杂交水稻组合及其亲本

利用RAPD分子标记对红莲型细胞质雄性不育(HL—CMS)杂交水稻组合及其亲本进行了DNA多态性分析。从124个随机引物中筛选出具有非常明显的多态性，且只能扩增出1～5个片段的4个引物能有效地区分和鉴定红莲型(HL)2个杂交水稻组合(粤泰系列，从广系列)的杂种及其亲本。     

电压依赖性钙通道 Cav3.1 的 cDNA 在爪蟾卵母细胞中的表达

Cav3.1是一种电压依赖性钙离子通道,cDNA全长7 625 bp.非洲爪蟾卵母细胞有表达外源基因的功能,被用于离子通道异源表达的研究中.pGEM-HE是卵母细胞的高效表达载体,但由于pGEM-HE多克隆位点处的酶切点较少,外源片段常不能直接插入.为了将Cav3.1的cDNA表达于卵母细胞中,首先对pGEM-HE的多克隆位点和β-Globin 3'端下游的切点进行了改造,引入需要的酶切点,删除了妨碍重组和mRNA转录的位点.并将Cav3.1的cDNA克隆到改造后的pGEM-HE载体中.将重组的质粒在爪蟾卵母细胞中表达,记录到了Cav3.1的通道电流,为以后的工作提供了基础.     

圆筒型植物细胞质膜的分布电荷所引起的电场和对细胞内压力的影响

根据细胞双电层模型和电学原理,推出了圆筒型植物细胞膜上电荷产生的细胞内压力的计算公式.利用该公式分析了植物细胞膜上电荷产生的电场力对细胞内压力的影响.得出了细胞的实际内压力和植物体的实际刚度比只考虑机械压力的理论结果要大,细胞的实际破裂情况比只考虑机械压力时的理论分析结果要容易些三点结论.     

紫菜苔Ogura细胞质雄性不育系花药发育的细胞形态学研究

通过甘蓝型油菜Ogura细胞质雄性不育材料与紫菜苔的种间杂交和连续回交,获得了稳定的紫菜苔Ogura细胞质雄性不育系,细胞形态学研究表明,该不育系的花药发育兼有无花粉囊型和单核败育型的特征,由于没有造孢细胞的形成或造孢细胞退化,不育系最多只有1－2个花粉囊,而可育系都是4个花粉囊,发育起来的不育系花粉囊里面的小孢子到单核期后不再向前继续发育,而是迅速退化以至解体,开花前彻底败育,在减数分裂前期,不育系绒毡层细胞中已经出现液泡,有肥大趋势,在单核小孢子退化以后绒毡层还很发达,而正常花药绒毡层的发育在减数分裂过程中达到高峰,四分体时出现退化迹象,开花前已完全解体。     

细胞质在细胞分化中的作用

研究了受精卵细胞质对分化的影响,果蝇性细胞、体细胞分化中极质的作用,体细胞分化中决定子的作用,异源细胞质的影响.基因的表达主要在转录水平上发生的,调节细胞中转录过程的因素是非组蛋白蛋白质,它是在细胞质中合成的.因此 ,细胞质对细胞分化起重要的作用.     

The multiple interactions between growth factors and microenvironment in vivo

The extracellular matrices (ECMs), which form the supportive meshwork around the cells, are largely composed of proteins and polysaccharide secreted by cells, while, growth factors, which almost all exist in ECMs, are polypeptides synthesized and secreted…     

甘蓝型油菜细胞质雄性不育相关基因的克隆及其转基因研究

将以ATP6作为诱饵蛋白,应用酵母双杂交(Yeast Two Hybrid,Y2H)已筛选到的3′端含有终止密码子的一个片段,通过5′RACE获得该基因全长并,命名为Bn-Zn,其编码氨基酸序列中含有一个RINGv(RINGvariant)结构.通过构建该基因的真核正向表达载体pCAMBIA2301G-Bn-Zn,以农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转入细胞质雄性不育恢复系油菜8410018幼苗下胚轴,经过诱导愈伤和再分化,成功得到了转基因植株.     

不同倍性鲤科鱼CyclinB基因内含子克隆与进化分析

运用PCR扩增、克隆、测序等技术,分别获得三倍体鲫鲂、四倍体鲫鲂、五倍体鲫鲂和团头鲂、草鱼、鲢鱼、鳙鱼等鲤科鱼CyclinB基因部分DNA序列．结合异源四倍体鲫鲤及其原始亲本红鲫和鲤鱼CyclinB基因对应DNA序列,对不同倍性鲤科鱼类CyclinB基因DNA片段序列进行比较分析．结果表明：由相同引物扩增的染色体数为48的鲂、草、鲢、鳙鱼,只扩增出1条DNA片段,片段长度分别为750bp,950bp,720bp和720bp,而染色体数目加倍的红鲫、鲤鱼、异源四倍体鲫鲤、异源四倍体鲫鲂,扩增出2条DNA片段（1200bp和900bp）,三倍体和五倍体鲫鲂扩增出3条DNA片段（1200bp,900bp和750bp）,每个DNA片段均含CyclinB基因第2,3内含子和第2,3,4外显子．序列分析表明,四倍体鲫鲤、三倍体鲫鲂、四倍体鲫鲂和五倍体鲫鲂与其母本1200bp片段同源性分别为99．5％,98．9％,99．5％和88．7％,与母本900bp片段同源性分别为97．5％,94．6％,94．2％和89．99／6,说明四倍体鲫鲤与多倍体鲫鲂1200bp和900bpCyclinB基因片段与母本红鲫同源性高,在进化上具有偏母性遗传特性．而三倍体和五倍体鲫鲂的750bpCyclinB基因片段-9父本同源性分别高达98．6％和98．2％,说明其来自父本团头鲂．在两性可育的异源四倍体鲫鲤和异源四倍体鲫鲂中存在各自父本CyclinB基因片段序列消除现象．此外,用CyclinB基因内含子3序列构建不同倍性鲤科鱼的系统进化树,结果表明,由CyclinB基因内含子序列构建的系统进化树可以正确反映亲缘关系较近的鲤亚科属间鱼类系统进化关系,而不适合亲缘关系较远的亚科间杂交鱼类系统进化分析．     

Evolutionary analysis of allotetraploid hybrids of red crucian carp × common carp, based on ISSR, AFLP molecular markers and cloning of cyclins genes

The allotetraploid hybrids of red crucian carp x common carp are the first reported artificially cultured polyploid fish with bisexual fertility and stable inheritance in vertebrate. Using ISSR and AFLP markers and the cyclins genes, the genomes and cyclin gene sequence changes were analyzed between the allotetraploid hybrids and their parents. The results indicated that the allotetraploids inherited many genetic characteristics from their parents and the genetic characteristics were stable after 15 generations. However, the allotetraploids had a closer genetic relationship with their original female parents and represented a bias toward the maternal progenitor. DNA fingerprinting analysis showed that the allotetraploids had undergone sequences deletion from their original parents and that the deleted sequences were mostly from the male parent＇s genome. Some non-parental bands were found in the allotetraploid hybrids. Sequences analysis of the cyclin A1 and B1 genes showed nonsynonymous substitutions of single nucleotides in codons that were different from their original parents, leading to non-parental amino acid loci. We speculate that the non-additivity in the allotetraploids, compared with their progenitors, could be an adjustment to the genomic shock from heterozygosity and polyploidy, allowing maintenance of genetic stability.