两个先天性并指缺指中国家系IHH基因的突变检测

为了探讨现有的两个并指缺指中国家系基因突变情况,以正常人作为对照,应用PCR和DNA直接测序方法,在两个家系(共7位患者)中研究IHH基因3个外显子的突变情况.检测IHH基因编码区以及外显子和内含子交接区与正常对照有无差异,在所有被检成员中,除第3外显子出现序列多肽性外,其余序列均未发现突变.研究认为这两个家系的致病原因并非IHH基因编码区的突变引起.     

虎纹捕鸟蛛毒素-ILys13突变对生物学活性的影响

从虎纹捕鸟蛛Selenocosmia (Ornithoctonus ) huwena的粗毒中分离纯化出来的虎纹捕鸟蛛毒素-I(HWTX-I)是一种多肽类神经毒素.为了进一步探明其结构与功能的关系,采用以固相多肽合成为核心技术的蛋白质工程方法直接构建了Ala取代Lys13的单残基突变体K13A-HWTX-I,并同时合成了HWTX-I的全序列sHWTX-I作实验对照.合成产物经质谱和序列分析鉴定无误后在含谷胱甘肽的缓冲体系中氧化折叠并用离子交换和RP-HPLC纯化.活性测定结果表明,氧化复性后,sHWTX-I与天然HWTX-I的生物学活性完全相同,而K13A-HWTX-I的生物学活性下降了87%,提示Lys13是与HWTX-I的生物学活性密切相关的重要残基.     

鲷鱼鳞多肽的酶法制备及抗氧化活性研究

以鲷鱼鳞为原料,经物理方式处理后,采用单因素实验考察液料比、pH值、温度、酶底比及酶解时间对鲷鱼鳞酶解液水解度和DPPH自由基清除率的影响.结合响应面优化设计对酶解条件进行优化,结果在液料比为28∶1、酶底比7.0%、pH值7.3、50℃、酶解6 h条件下,所得酶解液水解度为10.35%,DPPH自由基清除率为82.33%.DPPH自由基清除、羟基自由基清除、还原力、金属螯合测试表明,酶解产物的抗氧化活性与浓度呈现剂量依赖性,具有抗氧化活性.分子量测定及氨基酸组成分析表明,酶解产物含有大量的寡肽,相对分子质量分布区间为180~1 000 u,其富含甘氨酸、丙氨酸、羟脯氨酸,且含有多种人体必需的氨基酸.     

DWT-PLS在SELDI-TOF MS血清多肽谱解析中的应用

针对表面增强激光解吸/离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF MS）血清多肽谱解析,首先采用离散小波变换（discrete wavelet transform,DWT）对数据进行滤噪、压缩;再采用偏最小二乘（partial leastsquares,PLS）法建立癌症诊断预测模型.考察了DWT对血清多肽谱数据预滤噪、压缩的效率,同时重点研究了小波分解尺度、主成分数对诊断预测准确率的影响.研究结果表明,采用DWT-PLS法解析血清多肽谱简便、高效、预测准确.     

鳕鱼皮复合肽的制备工艺研究

采用木瓜蛋白酶和风味酶构成的复合酶对鳕鱼皮蛋白进行水解,通过单因素和正交试验确定复合酶水解的最佳条件为：木瓜蛋白酶和风味酶复合比为3：1,加酶量为40 000 U/g,水解温度45℃,料液比为1：2,水解pH为6.5,水解时间为4.5 h。最佳条件下鳕鱼皮蛋白水解度可达22.45%。     

燕麦多肽数据库及降血糖活性的虚拟筛选

为了深入研究燕麦多肽中可能发挥降血糖功能的活性多肽分子，本文首先从文献中调研了从燕麦中提取鉴定得到的多肽，构建了对应的燕麦多肽数据库，并基于DPP4蛋白对多肽数据库进行了虚拟筛选.随后，针对筛选获得的6个多肽分别进行了100 ns的分子动力学模拟.从模拟之后稳定结合的构象分析了不同多肽分子与DPP4的相互作用信息，并分别计算了不同多肽分子与DPP4的结合自由能.结果表明，从燕麦多肽数据库中筛选得到的多肽可以与DPP4蛋白稳定结合，其中2个多肽分子与DPP4的亲和力相对较强.本文得到的多肽分子可以作为后续DPP4抑制剂设计和改造的先导分子，燕麦多肽数据库也可用于研究燕麦的其他生物学功能.     

美洲大蠊多肽和顺铂联用对HepG2细胞凋亡及自噬的影响

采用MTT法检测美洲大蠊多肽（PAP-3）与不同浓度的顺铂（DDP）单用或联合使用对人肝癌HepG2细胞增殖的影响；采用流式细胞术检测PAP-3、DDP单独或联合给药干预对HepG2细胞凋亡的影响；Western Blot检测PAP-3、DDP单独或联合给药后HepG2细胞内自噬相关蛋白p62、LC3、Beclin-1、Atg5及PI3K的表达。实验结果显示，与DDP单独给药相比，PAP-3与DDP联合给药对HepG2的细胞的抑制作用更强；PAP-3与DDP联合给药组中细胞的凋亡率与DDP和PAP-3单独给药组相比均有升高（P ＜ 0.05)。与对照组相比，DDP组中，p62蛋白水平降低，LC3II蛋白水平升高，LC3II/I的比例也升高，表现出细胞自噬流的活化；与DDP组相比，联合给药组中p62蛋白水平回升，LC3II蛋白水平和LC3II/I的比例均有回落。且联合给药组中PI3K、Atg5、Beclin-1等自噬相关蛋白的量均较DDP组减少，而凋亡相关的Caspase-3蛋白的表达量则较DDP组增加。据此推测，PAP-3和DDP的联用可以通过抑制HepG2细胞自噬相关蛋白的表达水平，抑制DDP带来的细胞自噬水平的升高，增加细胞对DDP的敏感性，从而诱导HepG2细胞凋亡。