在大肠杆菌中克隆类产碱假单胞菌基因启动子

类产碱假单胞菌 (Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ)是 1991年从重庆歌乐山林场自然病死的黄脊竹蝗(Ｃｅｒａｃｒｉｓｋｉａｎｇｓｕ)中分离到的一种新的病原菌 ,对多种草地蝗虫有较强的感染力[1] .近年来对其杀虫致死机理、杀虫蛋白[2 ] 、安全性[3 ] 等方面进行了深入研究 ,证明该菌对蝗虫致病是由于其代谢产生的一种杀虫蛋白所致 .该蛋白分子量为 2 5 10 0Ｄａ ,经研究表明 ,该菌无芽孢 ,本身具有较强的毒蛋白 ,故具有构建成为基因工程菌广泛用于生物防治的潜力 .我们采用启动子探针型载体 ｐＳＵＰＶ4 ,分离Ｐ…     

甜菊(Stevia rebaudiana)糖基转移酶基因的克隆及序列分析

利用与植物次生代谢产物糖基化相关的UDPG糖基转移酶的特征性保护区域，设计了同源简并引物，以甜菊基因组DNA为模板，PCR扩增获得甜菊糖基转移酶基因片段，根据获得的基因片段设计引物GSTr和GSTf，分别与cDNA文库的T3和T7通用引物扩增获得全长核苷酸序列的甜菊糖基转移酶基因，定名为sud pt-2，该基因全长1662bp，包括poly(A)和一个1362bp的开放阅读框，编码454个氨基酸。与常见的糖基转移酶基因的相似性达44％-77％，且具有UDPG糖基转移酶的特征性保守序列。分子发育进化分析表明，此基因为类黄酮糖基转移酶基因家族成员。     

查尔酮合酶基因的克隆及双元载体的构建

以中国水仙为材料，利用RT-PCR方法克隆查尔酮合酶基因(CHS)的cDNA，核酸序列分析表明，该基因的编码区长1167bp，编码389个氨基酸，通过进一步的中间克隆，将CHS连上CaMV35s启动子和Tnos终止子。进一步将重组片段插入植物表达载体pCAMBIA1301,PCR及测序结果都证明植物双元表达载体p1301BΩＣ构建获得成功。为进一步在植物中表达CHS奠定了基础。     

cDNA文库的差异筛选与抑制性减数杂交相结合分离胡萝卜体细胞胚根发育相关基因

应用cDNA文库差异筛选与抑制性减数杂交相结合的技术程序,并通过反向Northern分析进一步验证,成功地从解调控12h的胡萝卜体细胞胚的cDNA文库中,分离到7个在解调控12h特异表达的基因.其中4个含有完整的编码框,分别编码木质葡聚糖内转糖基化酶、脂肪酸去饱和酶、一种poly(A)结合蛋白和一种酰基转移酶.另外3个是5′端部分缺失的cDNA基因片段,分别编码三磷酸甘油醛脱氢酶、一种糖蛋白和一种与单链RNA/DNA结合的蛋白.对其中部分基因的Northern分析结果显示,它们的表达量在蔗糖调控下的胡萝卜体细胞胚根发育的不同时期均有显著变化,说明它们都是与胚根发育相关的基因.     

水稻S5区候选克隆R2I19的筛选及序列信息学分析

以水稻广亲和品种Cpslo17为材料，构建了一个覆盖9倍核基因组的cosmid库，其平均插入片段约40kb。以与广亲和位点紧密联锁的单拷贝分子标记BAC23D12的R末端为探针，从cosmid库中筛选得到一个阳性克隆R2I19（－32kb)。结合S5位点的高密度连锁图和物理图谱，初步确定为S5区侯选克隆。对该克隆的2个TAC亚克隆TRW1510（－15kb)及TRW1517(-15kb)进行了初步的生物信息学分析，证实与已知的水稻基因组序列有很高的同源性，并显示其中可能含有与水稻育性相关的基因。     

人表皮生长因子(hEGF)基因的合成、鉴定及植物表达质粒的构建

用PCR方法合成了人表皮生长因子（hEGF）基因，构建了原核表达质粒p 20T-hEGF，研究了原核表达的重组蛋白hEGF的生物学活性，并构建了植物表达质粒，研究表明：无论是融合蛋白GST－hEGF或纯化的hEGF蛋白，都有相当高的生物活性，hEGF蛋白对Hela细胞的增殖有很好的促进作用，免疫小鼠亦能产生很高的免疫应答反应。     

NaCl诱导表达的盐藻果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因克隆及原核表达

通过RACE技术克隆到盐藻（Dunaliella salina Teod.)果糖－1，6－二磷酸醛缩酶（DsALDP)的全长cDNA,对其序列分析及在GeneBank中进行同源搜索，发现DsALDP基因属于果糖－1，6－二磷酸醛酶基因家族，其与植物叶绿体果糖－1，6－二磷酸酯缩酶（AldP)基因的一致性为73％－66％。Northern杂交结果及醛缩酶活性分析均表明它角为在盐诱导下特异表达。将DsALDP cDNA构建到pET32a载体上，转入E.coli BL21进行表达分析。IPTG诱导后可以检测到－62ku基因产物大量表达。经不同浓度NaCl处理，表达DsALDP基因产物的细菌耐盐性明显高于对照组。     

产气荚膜梭菌α毒素研究进展

对产气荚膜梭菌α毒素的组成、结构、理化性质、作用机理、检测及分子遗传等方面的研究进展作了简要综述。     

大肠杆菌caiE基因的克隆与高效表达

用聚合酶链反应（PCR）从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱代谢相关酶基因cai E,将其克隆到克隆载体pBluescripy SK中，测序表明：该基因有612bp，与文献报道相比，有10个核苷酸不同，相应的翻译氨基酸有6个相异，将该基因重组到ColE1为复制子，T7为启动子控制下的分泌型表达载体pET-22b( )中，构建表达质粒pETCaiE，重组到载体pACYC184中构建以p15A为复制子，Lac为启动子的表达质粒pACYC-CaiE；重组到载体pWSK129中，构建以pSC101为复制子，T7为启动子的表达质粒pSC-CaiE。上述表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经1mmol/L异丙基硫代－β－D－半乳糖苷（IPTG）诱导后，均可表达，SDS－PAGE分析表明表达蛋白分子质量约26ku，表达量占菌体总蛋白质的比例分别为pETCaiE30%,pACYC-CaiE8%,pSC-CaiE5%。     

LZ—8基因的克隆及其在毕赤酵母（Pichia pastoris）中的表达

用PCR从灵芝（Gamoderma lucidum)基因组扩增免疫蛋白LZ－8基因，将其构建到酵母表达质粒pPICZaA中，采用电激转化法转化毕赤酵母，获得转化子。对其Sourthern杂交分析，结果表明LZ－8基因整合到毕赤酵母基因组。对转化酵母作发酵培养，SDS－聚炳烯酰胺凝胶电泳检测到LZ－8蛋白的表达。