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121.
利用聚合酶链式反应(PCR)方法,以IGF-IcDNA为模板,扩增IGF-I的基因,在序更测定确证后,将其定向克隆到载体pExSecl上,构建了IGF-I融合表达载体pExIGF,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明:含有重组表达质粒的菌株可表达出约32.58%的6KD融合蛋白,且主要以可溶性形式存在。经IgG-Sepharose亲和层析一步纯化后,可获得纯度的90%的融合蛋白,经Wes 相似文献
122.
盐藻3—磷酸甘油脱氢酶基因克隆 总被引:4,自引:1,他引:4
采用Lambda置换型载体EMBL3构建了盐藻基因组文库,文库大小为1.8×104,插入片段大小为10~20kb,从盐藻基因组文库中获得3个3-磷酸甘油脱氢酶基因的阳性克隆,斑点杂交证实了原位杂交的真实性 相似文献
123.
睫状神经营养因子(Ciliary neurotrophic factor,CNTF)是第一个被发现可促进离体和在体运动神经元存活、对神经系统正常发育和受损神经的再生修复有重要作用的神经因子,主要存在于星形胶质细胞和施旺细胞.人CNTF基因定位于11号染色体长臂的近例端,其基因结构不与神经营养素家族同源也不含信号肽.我们发现大鼠坐骨神经再生过程中CNTF的基因表达下调,提示它的表达量与损伤后胶质细胞的增殖未必匹配.国外已重组了人CNTF,国内尚未见报道.由于我们没有人系统神经的cDNA文库,故用大鼠CNTFcDNA探针来检测人视神经胶质细胞瘤和人脑胶质母细胞瘤细胞系中是否有人CNTF的表达,再用反转录PCR克隆出人CNTF cDNA,目的是获得重组的人CNTF蛋白. 相似文献
124.
水蛭素-RGD序列融合蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达(简报) 总被引:1,自引:0,他引:1
水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,分子量约为7 kD.它是天然存在的最专一有效的凝血酶抑制剂,无明显毒副作用,用量低,因此可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病.RGD 序列是纤维蛋白原等粘附因子上以 Arg-Gly-Asp 为核心的小肽序列,通过与活化血小板上纤维蛋白原受体 GPⅡb/ Ⅲa 结合而导致血小板聚集.因此外源 RGD 序列可通过竞争性结合该受体而阻断血小板的聚集,抑制血栓的形成.RGD 序列与水蛭素融合可获得同时具有抗凝血酶和抗血小板聚集双功能的新型抗栓剂.本文首次报道重组水蛭素 HV3与 RGD 序列融合蛋白基因克隆并在枯草芽孢杆菌中表达的结果. 相似文献
125.
一种新的水稻肌动蛋白基因Act的分子克隆及特征分析 总被引:4,自引:0,他引:4
以植物Rho家族成员osRACD为诱饵,采用酵母双杂交体系从水稻幼穗中分离到肌动蛋白基因家族的一个新成员-Act.借助5′RACE技术克隆到该基因的cDNA全长,其中含有一个1134?bp的读码框,编码377个氨基酸和一个终止密码子.同源性比较显示与其他已知的水稻肌动蛋白有81.8%~96%的相似性. 生物信息学方法分析了蛋白的修饰位点、基因的结构和进化关系. Southern杂交显示Act是单拷贝基因,RT-PCR显示该基因在多种组织有广泛的表达,但在不同发育阶段表达量有明显变化. 还就Rho家族和肌动蛋白家族在进化和功能上的关系进行了讨论. 相似文献
126.
一种高效、稳定的分泌型原核表达载体的构建及应用 总被引:2,自引:0,他引:2
以本室构建的原核表达载体pTO-T7为基础载体,PCR合成ompT引导序列,插入该载体多克隆位点上游,构建了分泌型原核表达载体pTO-OT.将2个外源基因克隆至pTO-OT,2个重组质粒在大肠杆菌中均得以高效表达.表达产量在25%~34%之间.Western blot分析证实了融合蛋白可被大肠杆菌信号肽酶有效地切割。并具有良好的免疫学活性.对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的表达稳定性,显示了其在基因工程中的应用价值. 相似文献
127.
128.
曾志红 《长春师范学院学报》2007,26(3):65-68
抗生素生物合成基因簇的克隆是药物创新和产量提高的必要前提,PCR技术、基因文库的构建及标记探针的筛选、异源宿主的表达和染色体步查等方法, 常用于抗生素生物合成基因簇的克隆.载体系统及生物信息学的发展对基因克隆产生了重大影响. 相似文献
129.
目的比较不同类型体细胞对生产转基因克隆胚胎效率的影响。方法利用脂质体介导的方法将质粒pEGFP-N1转染到五指山小型猪胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞,经过G418筛选后均获得了阳性细胞株。然后分别以两种类型转基因细胞以及未转基因细胞为核供体进行体细胞核移植,比较不同类型供体细胞克隆胚胎的囊胚发育率。结果胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞克隆胚的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,8.3%vs.7.1%);转基因胎儿成纤维细胞(9.6%)和转基因骨髓间充质细胞(9.9%)克隆胚胎的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,9.6%vs.9.9%);每一种类型供体细胞转基因与否对克隆胚的囊胚发育率无影响(P>0.05)。结论通过体细胞核移植技术,小型猪骨髓间充质细胞与胎儿成纤维细胞均可有效地生产转基因囊胚。 相似文献
130.
A brief summary of major advances in cotton functional genomics and molecular breeding studies in China 总被引:1,自引:0,他引:1
QIN YongMei ZHU YuXian 《科学通报(英文版)》2007,52(23):3174-3178