卵泡液中LPO及SOD表达水平与IVF结局的相关性研究

氧化应激损伤对于女性的生殖功能起到一定的影响,可能参与了与女性生殖功能有关的病理过程。通过检测体外受精试管婴儿患者卵泡液中脂质过氧化物（LPO）和超氧化物歧化酶（SOD）水平,并探讨其与卵子受精率、卵裂率以及妊娠的相关性。收集47名唐都医院生殖中心患者122份卵泡液,采用TBA法检测脂质过氧化物LPO,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶SOD。结果显示SOD表达水平与受精率、卵裂率有相关性。LPO表达水平与胚胎的受精率、卵裂率以及妊娠率负相关,LPO可能是IVF妊娠结局的一个预测指标。     

黄体生成素对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外发育的影响研究

通过使用改良的TCM199无血清培养系统,在96孔细胞培养板中,每孔放入一个腔前卵泡等条件下,探索添加物黄体生成素对小鼠腔前卵泡卵母细胞体外生长发育的影响,旨在摸索一套适合小鼠腔前卵泡体外生长发育的培养体系。结果表明:随着浓度的增加,卵泡和卵母细胞的直径都不同程度的有所增长,其中200mIU/mL浓度组在卵泡培养的同期时间,卵泡和卵母细胞的增长值最大,与其他各浓度组之间存在显著性差异(P0.05)。卵泡培养到第2天时,对照组(0浓度组)卵泡存活率最高,为94%。但是培养到第6天时,200mIU/mL浓度组卵泡存活率最高,为62.5%。从卵泡成腔率来看,卵泡培养到第4天时,300mIU/mL浓度组卵泡成腔率最高,为24.4%。培养到第6天时,200mIU/mL浓度组卵泡成腔率最高,为35.4%。从卵泡发生生发泡破裂率和排出第一极体来看,300mIU/mL浓度组均略高于200mIU/mL浓度组。实验结果证明200mIU/mL浓度组与其他浓度组相比卵泡存活率最高,成腔率最高。且卵泡及卵母细胞增长最快,但发生生发泡破裂率、排出第一极体率次于300mIU/mL浓度组。     

褪黑激素被动免疫对母鸭卵泡发育和垂体激素水平的影响

在秋冬光照变短季节,选择产蛋量已下降的68周龄仙湖三号母鸭30只,随机分成三组。试验组用效价为1∶3200的兔化褪黑激素血清抗体进行被动免疫,对照组用正常兔血清进行被动免疫。在第三次免疫3h后每组随机选择6只母鸭采集血液,每隔4h采血1次,血样采用化学发光定量免疫分析测定血浆中的FSH,LH的含量,采完血后剖检卵巢,对卵泡进行分级计数。结果表明,经过三次免疫,可提高FSH水平(P>0.05),但对卵泡发育的影响差异不显著。提示在短日照下通过被动免疫可中和母鸭体内MLT,增加母鸭垂体激素水平,对母鸭生殖机能具有一定的激发作用。     

卵母细胞的不同对牛体外受精效果的影响

为了进一步提高牛体外受精（ＢＩＶＦ）胚的发育率，探讨了来自不同大小卵泡、具有不同卵丘细胞层数以及细胞质形态不同的卵母细胞对牛体外受精效果的影响。结果表明：１）分别采自直径大于５ｍｍ、２￣５ｍｍ和小于２ｍｍ的卵泡的卵母细胞，经体外成熟、体外受精后，卵裂率分别为５４．５％（３０／５５）、６４．４％（８５／１３２）和５０．４％（６３／１２５）。其中，２￣５ｍｍ卵泡的卵母细胞的体外受精结果显高于小于２ｍ     

卵泡刺激素促进卵巢颗粒细胞增殖分化的信号通路的研究进展

卵泡刺激素（FSH）是一种垂体前叶合成和分泌的糖蛋白激素,是卵巢发育的重要激素,可与卵巢颗粒细胞膜上的特异性受体结合从而促进细胞的增殖分化,激活细胞内芳香化酶生成雌激素和孕激素。FSH在卵巢颗粒细胞中主要依靠cAMP—PKA信号通路促进细胞增殖,同时也发生多种信号通路,ERK1／2、ERK5、p38MAPK、P13K／Akt、VEGF均参与FSH促进卵巢颗粒细胞的增殖分化;它们之间相互作用促进卵巢颗粒细胞的增殖。     

广西巴马小型猪卵泡抑素(Follistatin)克隆及原核表达

目的通过RT-PCR扩增获得广西巴马小型猪Follistatin的cDNA全序列,经克隆测序分析其cDNA序列结构,进而构建pET-Fo原核表达质粒,使用IPTG诱导表达获得其融合蛋白,为将来进一步研究Follistatin对广西巴马小型猪肌肉生长和繁殖性能的影响奠定基础。方法从广西大学巴马小型猪卵巢中提取总RNA,并以其为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),在合成的特异性引物引导下,扩增获得广西巴马小型猪卵泡抑素(Follistatin)cDNA的全序列,长度为1 035 bp。将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行序列测定及分析。结果广西巴马小型猪卵泡抑素cDNA序列与GenBank中已报道的家猪卵泡抑素同源性高达99.4%。同时,将目的基因插入到原核表达载体pET 32a 多克隆位点中,构建了Follistatin的原核表达载体,并转化于大肠杆菌BL21。转化菌经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析。结论实验已成功地表达了Follistatin的融合蛋白(约58.4 ku)。     

促卵泡激素对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外发育的影响研究

通过使用改良的TCM199无血清培养系统,在96孔细胞培养板中,每孔放入一个腔前卵泡等条件下,探索添加物促卵泡激素对小鼠腔前卵泡卵母细胞体外生长发育的影响,旨在摸索一套适合小鼠腔前卵泡体外生长发育的培养体系.结果表明：随着浓度的增加,卵泡和卵母细胞的直径都不同程度的有所增长,其中400 mIU/mL浓度组在卵泡培养的同期时间,卵泡和卵母细胞的增长值最大,与其他各浓度组之间存在显著性差异（P＜0.05）.培养到第6天时,400 mIU/mL浓度组卵泡存活率最高,为66.7％.从卵泡成腔率来看,卵泡培养到第4天时,600 mIU/mL浓度组卵泡成腔率最高,为35％;培养到第6天时,400 mIU/mL浓度组最高,为45.2％.从卵泡发生生发泡破裂、排出第一极体来看,400 mIU/mL浓度组均高于其他浓度组.结果表明,400 mIU/mL浓度组卵泡和卵母细胞的增长值最大;从培养时间上看,卵泡存活率、成腔率、生发泡破裂率、排出第一极体率都最高,分别为66.7％、45.2％、16.6％、14.3％.     

卵泡抑素对人绒毛膜促性腺激素分泌及基因表达的调控

用ＮＵＣＣ－３绒癌细胞株作为胎盘的体外实验模型,研究了卵泡抑素对ＧｎＲＨ刺激ｈＣＧ分泌及ｈＣＧα,βｍＲＮＡ水平和稳定性的影响。ＦＳ对ｈＣＧ基础分泌及ｈＣＧα,βｍＲＮＡ水平无影响。     

卵泡生长、分化和闭锁的调控

研究卵泡生长启动和分化对于了解雌性生殖机制至关重要. 哺乳动物卵细胞在胚胎发育过程中已经形成, 并且在生殖嵴每个卵原细胞都与若干原始卵泡细胞组合分化成一个原始卵泡. 出生后原始卵泡数不再增加. 原始卵泡生长启动的分子机制至今还不清楚. 相关研究的最新进展表明: (ⅰ) 原始卵泡的生长启动可能主要受卵泡内外产生的生长因子、激活素和孤儿受体等调节, 而可能不受FSH调节; (ⅱ) 在颗粒细胞上一旦分化出现FSH受体, FSH即与雌激素以及激活素/抑制素、卵泡抑素一起成为决定卵泡分化倾向的主要因素; (ⅲ) 卵泡闭锁可起始于颗粒细胞或卵母细胞凋亡两种形式, 卵母细胞中组织型纤溶酶激活因子(tPA)蛋白活性的提前表达将引发卵母细胞凋亡.     

妊娠大鼠卵巢卵泡无甾体激素合成能力

在整个妊娠期间大鼠卵巢中都可见到有腔卵泡 .这些卵泡具“生理”上的不成熟性 ,即使在hCG诱导下也不能排卵 .实验意欲探讨妊娠大鼠卵巢卵泡细胞是否具有甾体激素合成能力 .而甾体激素合成灵敏调节蛋白StAR是甾体激素合成的关键调节因子 .用StAR反义RNA探针和抗StAR兔血清通过原位杂交和免疫组化检测妊娠各期大鼠卵巢中卵泡StAR的表达情况 ,以直接证实这些卵泡是否能合成甾体激素 .结果表明 ,正常性周期中动情前期或动情期有腔卵泡的膜细胞和靠膜颗粒细胞表达StARmRNA和蛋白质 ,而妊娠期间卵泡的颗粒细胞和膜细胞均不表达 .这证实妊娠期间的卵泡没有甾体激素合成能力 .