盐藻(Dunaliella viridis)细菌人工染色体文库的构建和鉴定

盐藻具有极强的耐盐能力,是研究植物耐盐机制的模式系统.为了对其耐盐机制进行深入的 研究,以pCC1BAC为载体,构建了盐藻的细菌人工染色体（BAC）文库.该文库共有9 216 个转化子,插入片段平均长度为55 kb,以单克隆形式保藏在96块96孔板中,并建立了四维P CR基因筛选体系,可以通过4轮PCR快速筛选获得阳性单克隆.根据本实验室分离到的两个盐 藻基因的cDNA序列（ DvSPT2和DvTPSP ）设计引物,通过PCR从该文库中各筛到4个阳性BA C克 隆,说明该文库能有效用于分离盐藻基因的基因组序列,据此推测该文库约覆盖4倍盐藻基 因组序列.     

全长基因的克隆

新基因全长cDNA序列、全长DNA序列的获得常常是分子生物学工作者面临的难题。本文就克隆全长基因的各种技术如文库筛选法、各种PCR技术及新发展起来的电子克隆法等方法作一简单综述。     

两株产纤维素酶细菌的分离和筛选

从林区土壤中分离能够分解纤维素的细菌菌株共15株,采用刚果红染色的初筛平板获取透明圈较明显的菌株8株。在此基础上,进行液体培养并测定酶活,得到2株酶活较高的菌株,分别编号为X18和X10-1-2。这两株菌均为G( )、形态杆状、可产芽孢、好氧,初步鉴定为芽孢杆菌属的两个不同种。     

用于生产低聚木糖的木聚糖酶菌株筛选

比较分别属于木霉属(Trichoderma)、毛壳属(Chaetomium)、黑曲霉属(Asperjgillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)的12个菌株的木聚糖酶活性,以蔗渣木聚糖为底物,分析不同菌株木聚糖酶水解产物中的糖类组成,考察木聚糖酶系的稳定性。结果表明,毛壳属菌株所产木聚糖酶的水解产物中,低聚木糖的比例普遍高于其它类型菌株,其中球毛壳AS3．3601不仅木聚糖酶的活性较高,而且酶系稳定性最好,水解液中木二糖、木三糖占总糖含量的76％以上。球毛壳AS3,3601的发酵液按最大剂量0．4ml／10g给小鼠灌胃,每天1次,连续7d,所有受试小鼠均无中毒反应,初步认为球毛壳AS3．3601对于口服是安全的。     

稻瘟病菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织生长和分化的影响及抗性筛选

利用目前稻瘟病不同的优势小种菌株的液体培养提取的粗毒素对水稻成熟胚进行处理,粗毒素液对水稻愈伤组织的生长及分化有严重的抑制作用,与对照相比差异性极显著;不同浓度的粗毒素提取液其作用效果不同,随着毒素浓度的增大或是作用时间的延长,水稻分化受到的抑制作用越强。水稻成熟胚组织培养中进行抗稻瘟病菌突变体筛选的毒素浓度在25％～30％较好;愈伤组织浸泡12～24h可以得到分化出苗。在愈伤组织上直接加上毒素并长时间处理对愈伤组织的生长有很大的破坏作用,每个愈伤组织滴加的毒素应小于2．0ml。不同的水稻品种产生的耐性不同,可以筛选出抗稻瘟病的突变体。     

胰升血糖素样肽-1受体激动剂高通量筛选细胞模型研究

为建立GLP-1受体激动剂的高通量筛选方法,将GLP-1受体质粒和报告基因质粒(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC/pGL3)按照1∶5的比例共转染到CHO细胞中,建立GLP-1受体激动剂筛选细胞株。利用GLP-1内源激动剂探索和优化每孔细胞接种密度、荧光素酶表达时间、Bright-GloTM试剂用量、DMSO浓度等筛选条件,建立可靠的筛选方法。当细胞数目为4×104个/孔,激动剂孵育时间为8 h,Bright-GloTM试剂4倍稀释,每孔DMSO终质量分数小于1%时,系统Z′-因子为0.75。利用此模型对中药提取物库进行检测,发现有5个样品显示出活性。结果表明,该模型能够用于GLP-1受体激动剂的高通量筛选。     

降解苯酚类污染物细菌的分离筛选

从某钢铁集团焦化厂污水处理曝气池取样,以苯酚为唯一碳源进行富集培养,然后经过分离与筛选,最后得到4株苯酚降解能力较强的菌株,这些菌株最高可耐受3.0 g.L-1的苯酚.苯酚降解能力测定表明,4株菌在72 h内能将浓度为1.5 g.L-1的苯酚完全降解,72 h内对浓度为2.0 g.L-1苯酚的降解率分别达到99.4%、80.5%、73.5%、70.1%.     

豆凝乳酶产生菌的筛选及诱变育种

从１０４份土样中分离到一株产豆凝乳酶的芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）,酶活力０．３ｕ／ｍｌ。经ＵＶ－ＤＥＳ诱变及培养基调整后,酶活可达１．６ｕ／ｍｌ以上,其最适产酶培养基组成：麦麸２．５％,（ＮＨ４）２ＳＯ４ ０．５％（ＮＨ４）２ＨＰＯ４ ０．５％,ＣａＣｌ２ ０．０５％。     

油田采油阻垢剂筛选研究

为了筛选出适合某油田使用的阻垢剂,通过分析油田水质及垢样的 XRD,发现垢样成分主要为碳酸钙和硫酸钙. 在测定了 11 种阻垢剂钙容忍度的基础上,采用静态实验法和模拟油田水体法,测定了各种阻垢剂的阻垢率,对比后,筛选出了适合油田水质特点和垢体类型的 POCA 阻垢剂,在 80 ℃油田水质环境下,其添加质量浓度为 20 mg/L 时,阻垢率为 81.27%,钙容忍度高于 20 000.     

牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277菌株外切聚磷酸酶的表达、纯化和结晶

外切聚磷酸酶(exopolyphosphatase,PPX)对于细菌在恶劣环境下引起的严紧反应、病原菌的致病性和抗生素耐药性等生物学过程必不可少。牙龈卟啉单胞菌是与牙周炎关系最密切的病原菌。为解析牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)ATCC 33277菌株的外切聚磷酸酶(PgPPX)的结构,首先利用大肠杆菌对PgPPX蛋白基因进行克隆与蛋白表达,然后依靠谷胱甘肽巯基转移酶标签对融合蛋白亲和层析后,采用阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱得到表面电荷、聚合形态均一的PgPPX蛋白,最后对纯化后的目的蛋白进行结晶条件筛选。结果表明:PgPPX蛋白在溶液中表现为二聚体形式,纯度大于98%,表达量高达30 mg/L,且该蛋白在0.2 mol/L MgSO_4·6 H_2O、20%PEG3350(m/V)条件下获得的晶体形状较好。