绿色木霉EG Ⅲ基因的克隆及其在工业酿酒酵母中的整合表达

通过RT-PCR从绿色木霉AS3.3711中克隆得到EG Ⅲ基因,序列分析显示该基因编码序列全长为1 257 bp,编码418个aa,且自身带有21个aa的信号肽序列,与里氏木霉eg3的同源性为99.6%.将该基因连入酿酒酵母多拷贝整合型表达载体pScIKP中获得重组质粒,线性化后电转化酿酒酵母工业菌株AS2.489,通过SDS-PAGE蛋白电泳、刚果红染色和酶活测定对转化子进行了分析.结果表明:转化子有明显的重组EG Ⅲ表达带,能够产生CMC水解圈,说明eg3基因已在酿酒酵母中获得了正确的分泌表达,表达EG Ⅲ的重组菌产酶高峰出现时间为60 h,最高酶活接近120 U/mL,重组酶EG Ⅲ的最适温度为60 ℃,最适pH为6.0,转化子的遗传稳定性达到99.17%,实现了绿色木霉eg3基因在工业酿酒酵母中的稳定高效表达.     

现代铸造系统的集成框架研究

为了进一步提高铸造企业竞争力,需要对铸造过程中的设备、工艺技术等组合即现代铸造系统进行一体化研究。在分析了现代铸造系统体系结构基础上,提出了一种现代铸造系统的集成运行框架。给出了现代铸造系统的体系结构,介绍了该体系结构中的工艺技术、铸造设备、辅助软件、管理方法、人员和信息5个组成部分,并分析了现代铸造系统的层次性、复杂性、高效性及协调性特点。阐述了集成框架的用户层、信息软件层、设备层、网络层及数据库层的具体任务和组成。     

绿色木霉纤维二糖水解酶Ⅱ基因的克隆及其在酿酒酵母中的高效表达

采用RT-PCR 的方法从目前最高效的纤维素酶产生菌之一的绿色木霉AS3.3711中克隆得到纤维二糖水解酶Ⅱ（CBHⅡ）的编码基因cbh2。序列测定和分析表明,该编码序列长1416 bp,编码472个氨基酸残基,与已公布的绿色木霉CICC 13038的cbh2仅在第263位存在一个氨基酸残基的差别（Gln替换为Pro）,而与里氏木霉VTT-D-80133的cbh2则完全同源。该序列已经提交GenBank,登录号为 DQ864992。利用信号肽预测软件SignalP 3.0发现该基因自身带有信号肽序列,其最大可能的切割位点在18和19位氨基酸残基之间。将该基因片段接入酿酒酵母高拷贝数整合型表达载体pScIKP中,得到重组表达质粒pScIKP-cbh2。经酶切线性化后电转化酿酒酵母AS2.489菌株,通过G418浓度梯度筛选出高抗转化子。转化子经蛋白电泳分析,发现该基因的信号肽序列能够被酿酒酵母识别,因此重组CBHⅡ成功分泌到了胞外。但可能由于酿酒酵母表达系统的过度糖基化作用,重组CBHⅡ比出发菌绿色木霉的CBHⅡ分子量要高许多,并且可能因为过度糖基化作用位点不同而形成了不同大小分子量的表达产物。转化子经CMC糖化力法测定酶活,发现该重组CBHⅡ酶活性并没有受过度糖基化作用的影响,最高可达7.71 U/mL,比大多数报道的要高。其作用的最适pH值为5.0,最适温度为65 ℃,且具有较好的热稳定性。     

肥胖／糖尿病过程中大鼠不同部位脂肪细胞大小的比较

为比较大鼠肥胖／糖尿病过程中脂肪分布及脂肪细胞大小的变化,初步阐明脂肪细胞大小与2型糖尿病发生相关性。将Wistar雄性大鼠随机分为3组,每组12只：普通饮食组（正常对照）,高脂饮食组（肥胖）,高脂饮食＋链脲佐菌素组（糖尿病组）。第0周随机抽取6只大鼠处死后,取皮下脂肪及腹膜内脂肪,用2．5％甲醛乙醇溶液固定,进行石蜡包埋,HE染色,制成切片。在400倍光学显微镜下随机选取10个视野检测统计脂肪细胞数量及面积大小（mm^2）。在饲养过程中分别选取第6、9、12、14周等4个时间点,每个时间点各组随机处死2只大鼠,取皮下脂肪及腹膜内脂肪进行相同处理。同时,在各个时间点对大鼠体重、血糖进行检测。各组大鼠皮下脂肪细胞与腹膜内脂肪细胞大小差异均有统计学意义（F=9．653,P=0．001;F=160．605,P=0．000）,其中正常组与肥胖组、正常组与糖尿病组差异都有统计学意义,而肥胖组与糖尿病组差异无统计学意义。不同部位脂肪细胞大小的差异无统计学意义。脂肪细胞的体积增大,与大鼠体重及血糖变化相平行。大鼠脂肪细胞的体积增大与肥胖／糖尿病的演进过程相平行,大鼠脂肪组织的分布与脂肪细胞的大小无明显相关性。     

基于仿真技术的连锁零售企业配送中心布局决策模型

合理的配送中心布局可以大大降低企业的物流营运成本和提高物流系统的运营效率.从零售业连锁经营和配送中心 本质特征分析入手,将连锁零售企业的配送中心布局决策问题界定为以设施成本、物流成本和快速反应能力等多重子目标达到最优的多目标多配送中心选址问题.在对影响配送中心选址布局的因素进行定性分析和定量分析的基础上,运用蒙特卡罗静态仿真进行成本分析和Arena动态仿真进行响应时间分析相结合的方法构建了多目标多配送中心布局决策分析模型,并采用AHP和TOPSIS相结合的综合评价方法分析相关指标和数据来确定最优方案. 最后,以一家大型连锁超市作为研究算例, 以珠三角地区作为布局分析区域,构建实物模型以验证决策模型的科学性和有效性.     

浅谈我国特种设备安全问题与管理

分析目前我国特种设备安全存在问题,并从五个具体方面加以阐述。重点从特种设备的安全检查及设备管理角度给出建议,从而达到提高设备安全系数的目的。     

高中英语新课改教学的思考

新课改对高中英语教学理念、教学目标、教学方式提出了新的要求,要求高中英语教师把新的理念引入教育教学,根据高中学生的认知特点和学习发展需要,逐步培养学生的英语能力。本文通过分析新课改下高中英语教学中存在的误区,指出落实新课改精神的关键在于教师,全面转变高中英语教师教学理念和不断提高教师自身素质是新课改成功与否的关键所在。     

斜齿圆锥齿轮与直齿圆锥齿轮应力分析研究

通过对斜齿圆锥齿轮弯曲应力和接触应力的分析,并与直齿圆锥齿轮进行比较,总结出斜齿圆锥齿轮的传动特点、承载优势和应用前景等。     

土地开发整理项目造价管理技术体系研究

本文针对目前土地开发整理项目造价管理现状及存在问题。通过采用不同的方法对“土地开发整理项目预算定额标准”、“土地开发整理项目估算标准”、“土地开发整理项目投资控制标准”进行分析研究,从而阐述3个标准之间的相互关系及在土地开发整理项目中不同阶段的意义和作用,形成一个科学化、标准化、规范化的土地开发整理项目造价管理体系,为项目投资决策部门提供科学依据。     

新甲型H1N1流感病毒血凝素基因(HA)突变网络结构

构建了新甲型H1N1流感病毒血凝素基因的变异网络图. 同源性比对表明, 来自墨西哥的一个病毒序列类型为此次新流感病毒的原始序列类型. 通过血凝素基因658A和1408T突变可将此新流感病毒序列分为墨西哥类型、过渡类型和纽约类型3个主要类型. 这3个类型在地理分布上具有明显差别.