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苜蓿花叶病毒复制酶基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建 总被引:3,自引:1,他引:3
以侵染苜蓿的苜蓿花叶病毒中国分离株(Alfalfa mosaic virus Chinese isolate,A1MV—Ch)RNA2为模板,利用人工合成的特异性引物,进行反转录及PCR扩增,分两段分别扩增了复制酶基因的5′端1.32kb和3′端及其非编码区的1.23kb cDNA序列.用限制性内切酶切割PCR产物后,与pUCl9重组,转化大肠杆菌DH5α,筛选重组质粒,用限制性内切酶分析及PCR鉴定,得到分别含有5′端序列和3′端序列的重组质粒。已由上述两种重组质粒构建了含有完整复制酶基因的重组质粒.进行了全序列测定,并与国外报道的A1MV-425株系的相应序列相比较,其复制酶基因编码区核苷酸序列同源性达97.8%,推测的氨基酸序列的同源性达97.6%,3′端非编码区核苷酸序列同源性为98.2%.并将全长复制酶基因与植物表达载体pROKⅡ重组,得植物转化载体pAlMV—FL. 相似文献
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本文对传统蒙医特色诊疗技法的传承人和创新型人才的培养模式进行研究,将以往的传统人才培养模式与现代教育手段相结合,试图探索一个集传承与创新、兼顾技术和能力,符合社会需求的传统疗法高水平人才培养模式. 相似文献
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农杆菌介导的ACC氧化酶反义基因转化甜瓜品种河套蜜瓜的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
将从甜瓜品种河套蜜瓜中克隆的ACC氧化酶基因cDNA片段反向构建到植物表达载体pROK II中,获得重组质粒pRACO 1,用三亲融合法将其导入根癌农杆菌LBA 4404中,转化河套蜜瓜子叶外植体,在芽诱导培养基M S IAA 0.8 m g/L BA 1.0 m g/L ABA 0.26 m g/L C ef 500 m g/L K an 75 m g/L中诱导生芽,待芽长到2cm左右转入M S IBA 0.5 m g/L C ef 300 m g/L K an 50 m g/L的培养基中诱导生根,1~2周后可诱导产生大量的根,形成完整的转化小植株.经PCR检测证明,目的基因已整合到河套蜜瓜的基因组中. 相似文献
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从纹皮蝇Ⅰ期幼虫中提取总RNA,RT-PCR扩增纹皮蝇Hypodermin B(HB)基因.将扩增基因进行克隆测序,构建原核表达载体pET30-HB,转化大肠杆菌BL21(DE3).用IPTG诱导表达后,得到表达量达全菌蛋白30%以上的特异性蛋白.SDS-PAGE分析表明表达产物主要以包涵体形式存在.Western blotting检测结果表明,获得的重组蛋白为重组Hypodermin B,具有较好的反应原性. 相似文献