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将本室克隆的编码复制酶基因3′端约1/2序列及其3′端非编码区的苜蓿花叶病毒中国分离株(AIMV-Ch)RNA:3′端cDNA,重组到植物表达载体pROKⅡ中,通过致瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,以叶圆片为转化材料,转化普通烟草,并获得了转基因植株.经卡那霉素抗性选择、PCR检测目的基因证明.AIMV RNA:3′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中.转基因植物的攻毒试验表明转基因植株对苜蓿花叶病毒产生高水平的抗性. 相似文献
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苜蓿花叶病毒复制酶基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建 总被引:3,自引:1,他引:3
以侵染苜蓿的苜蓿花叶病毒中国分离株(Alfalfa mosaic virus Chinese isolate,A1MV—Ch)RNA2为模板,利用人工合成的特异性引物,进行反转录及PCR扩增,分两段分别扩增了复制酶基因的5′端1.32kb和3′端及其非编码区的1.23kb cDNA序列.用限制性内切酶切割PCR产物后,与pUCl9重组,转化大肠杆菌DH5α,筛选重组质粒,用限制性内切酶分析及PCR鉴定,得到分别含有5′端序列和3′端序列的重组质粒。已由上述两种重组质粒构建了含有完整复制酶基因的重组质粒.进行了全序列测定,并与国外报道的A1MV-425株系的相应序列相比较,其复制酶基因编码区核苷酸序列同源性达97.8%,推测的氨基酸序列的同源性达97.6%,3′端非编码区核苷酸序列同源性为98.2%.并将全长复制酶基因与植物表达载体pROKⅡ重组,得植物转化载体pAlMV—FL. 相似文献
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马铃薯卷叶病毒中国分离株外壳蛋白基因及其上游先导序列的cDNA克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
按照马铃薯卷叶病毒(PLRV)核苷酸序列,针对CP基因及其上游基因间隔区全长约0.8kb的区段设计合成两个特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株(PLRV-Ch)的RNA为模板,反转录合成CDNA第一条链,再经PCR扩增合成cDNA,将CDNA克隆于pUC19质粒.限制性酶切分析和核苷酸序列测定表明克隆的PLRV-Ch外壳蛋白(CP)基因及其上游基因间隔区的全长CDNA共824个核苷酸,与国外报道的4个PLRV分离株的核苷梳序列相比具有高度同源性.PLRV的外壳蛋白基因序列与其上游基因间隔区相比保守性更强. 相似文献
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从纹皮蝇Ⅰ期幼虫中提取总RNA,RT-PCR扩增纹皮蝇Hypodermin B(HB)基因.将扩增基因进行克隆测序,构建原核表达载体pET30-HB,转化大肠杆菌BL21(DE3).用IPTG诱导表达后,得到表达量达全菌蛋白30%以上的特异性蛋白.SDS-PAGE分析表明表达产物主要以包涵体形式存在.Western blotting检测结果表明,获得的重组蛋白为重组Hypodermin B,具有较好的反应原性. 相似文献