野油菜黄单胞菌8004胞外酶及多糖合成正负调控基因在X.c.NK01菌中功能初探

利用野油菜黄单胞菌（Xanthomonascompestris）8004正、负调控胞外酶及多糖合成的基因片断分别经三亲本接合方法导入黄单胞菌NK01抗性突变株中，测定接合于四种胞外酶活力和多糖合成能力，确定该正、负调控基因对NK01的作用．结果表明，负调控基因作用明显，使NK01胞外多糖及胞外酶产量显著降低，正调控基因未见明显的胞外酶及多糖合成的增强作用．本文并对正、负调控基因的作用方式作了初步探讨．     

缩酮丙酮酸转移酶基因在野油菜黄单胞菌中的表达

将野油菜黄单胞菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）ＮＲＲＬ－Ｂ－１４５９菌株的缩酮丙酮酸转移酶基因,在ｐＲＫ２０７３辅助质粒的协助下,经三亲本接合法,导入野油菜黄单胞菌ＮＫ０１小菌落的抗性突变株（ＮＫ０１·Ｓ·１）中,测定各接合子的产胶率、黄原胶粘度及丙酮酸含量,得到一系列优于原始菌株的接合子,其中四株的产胶率、丙酮酸含量及黄原胶粘度分别较出发菌株提高７．２８～１０．６０％、４０．２４～４１．４２％和１０．７９～２２．３０％．     

以甘蔗糖蜜为碳源发酵生产黄原胶的研究

以甘蔗糖蜜为碳源生产黄原胶,摇瓶发酵７２ｈ,其产胶量可达３．２６％,碳源转化率为５６．２％,成品粘度１７６０ｍＰａ．ｓ,剪切值６．５３。实验结果表明,甘蔗糖蜜完全可以代替蔗糖、玉米淀粉或葡萄糖为碳源发酵生产黄原胶,从而为完善我国黄原胶生产技术提供了一条新的途径。     

羊生长激素在大肠杆菌中的表达及分泌初探

利用PCR方法,将羊生长激素(oGH)成熟蛋白编码序列扩增,再将扩增产物接入分泌型表达载体pET12a(SalI位点)中,利用宿主菌自身的OmpT信号肽引导羊生长激素在E.coliBL21(DE3)中分泌,获得正向插入重组质粒pET12-oGH8,对重组子及对照菌进行诱导表达,薄层色谱扫描(SDS-PAGE)检测结果发现,oGH在OmpT信号肽引导下未见明显分泌,推测oGH自身的氨基酸序列可能是影响其在E.coli中分泌的因素     

人胎盘催乳素在大肠杆菌中的表达

用ＰＣＲ方法扩增人胎内乳素（ｈＰＬ）ｃＤＮＡ得到５９７ｂｐ的片段,在其两端加上了合适的酶切位点及起始、终止密码子,钭其与高效表达载体ｐＢＶ２２０重组连接,转入大肠杆菌ＤＨ５α,得到稳定遗传的重组质粒转化子ｐＢＶ－ｈＰＬ。ｐＢＶ－ｈＰＬ菌株经热诱导后,有２２ｋＤ的蛋白表达,表达量占菌体总蛋白的１２．９４％,ｈＰＬ表达蛋白以包涵体形式存在,复性处理后,得到有生物活性的成熟蛋白。     

恶臭假单胞菌萘质粒ⅠNL基因的克隆及酶切图谱

恶臭假单胞菌（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａＧ７）携带的质粒ＮＡＨ７，经限制性内切酶ＥｃｏＲＩ切割后，产生含有萘降解酶全部基因（２４，６ｋｂ）的片段，此片段插入到载体ｐＵＣ１１９的多克隆位点，构成了ｐＫＡＯ质粒，此质粒经ＨｐａＩ，ＥｃｏＲＩ酶切获得的５．１ｋｂ片段亚屯隆到ｐＵＣ１１９中，衍生出ｐＮＮ１质粒，绘制出内切酶图谱。从ｐＮＮＩ质粒上切下含目的基因ｎａｈＩ、ｎａｈＮ和ｎａｈＬ的ｋｐｎＩ－ｋｐｎＩ片段（２．３ｋｂ）．正向插入载体ＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＋中获得重组质粒ｐＮＮ２，反向插入为ｐＮＮ３，将其转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中，目的基因得以大量增殖。