Tm值差异型不对称PCR方法的建立及其在分子诊断中的应用

多数分子诊断方法对靶基因的检测都是以单链DNA为基础的,如何获得大量和高质量的单链靶DNA分子一直是研究热点.以包含BRCA1基因上3个单核苷酸多态性(SNP)的DNA片段为研究对象,通过调整不对称扩增引物碱基序列组成(5′-端引入错配或加入锁核苷酸(locked nucleic acid,LNA)),使用相差10倍浓度来增加不对称引物间Tm值差异,改进扩增条件(添加增强剂的扩增缓冲液,不同退火温度的二阶循环扩增程序)后,进行不对称扩增来产生大量单链靶DNA产物.结果表明Tm差异型不对称PCR(Tm difference asymmetric PCR,TDA-PCR)可有效提高单链DNA分子产率,降低引物设计难度,也扩大了模板序列的适用范围.此外,还针对禽流感病毒H5N1的血凝素(haemagglutinin)HA基因保守序列进行不对称扩增,用获得的单链DNA为模板进行焦磷酸测序检测,所得结果与参考序列一致且无明显干扰信号.因此,采用Tm值差异型不对称PCR可使焦磷酸测序等分子诊断流程更为简便,成本更低,效率更高,具有很好的通用性和实用性.     

大采高综采煤壁片帮的原因与防治

综合机械化放顶煤开采技术是近些年来发展较快、较为先进的采煤方法之一。它具有单位产高、掘进率低、适用范围广、减少工作面搬家次数、且成本相对较低等优点。但在煤层开采中,特别是仰斜开采时,片帮现象较易发生。如不能及时加以有控制,极易导致上覆煤岩层在支架前端发生冒落现象,就会造成工作面支架前端发生直接顶大面冒落,而影响生产,并给煤矿生产带来极大的不安全隐患。     

高层建筑防雷设计与施工技术

高层建筑的防雷工程十分重要。文章探讨了高层建筑防雷设计问题，并分析了高层建筑防雷的施工与技术。     

关于建筑工程施工中深基坑施工技术的探讨

随着我国建筑业的快速发展,人们对建筑物的构造及使用要求也在提高,这就需要增加基坑的深度。尤其是在城市的中心地带,人口集中,所以基坑的挖掘会有一定的难度。如何在保证深基坑施工安全的同时,又加快工程进度、提高经济效益、降低成本,这是一个指的探讨的课题。     

配电网中损耗原因分析及管理措施

配电网是电力系统的重要组成部分，也是电力系统正常、高效运行的关键部分。在配电网的运行中，由于技术上或者管理上的原因，造成配电网在运行中会出现损耗。配电网运行中损耗的存在，使供电企业利益受到损失；同时，也降低了电网运行的效率和质量。因此，加强配电网线损的管理，对于提高企业的利润和建设资源节约型社会是十分有必要的。以配电网中的损耗为切人点，分析配电网中损耗的具体原因，并研究加强配电网损耗管理的具体措施。     

对部分小（二）型以上水库的分析与探讨

上虞市共有小（二）型以上水库52座,总库容1910万米3、灌溉农田15237亩,水库基本上建造于上世纪60年代,在缺少设计技术、施工技术和地质勘察资料技术的条件下建造,由于这些原因,使得水库在很大程度技术、质量、安全方面的隐患。很多水库险象环生,对人民的生命财产安全和社会的经济发展构成危险。部份＂屋顶水库＂更是直接威胁着下游人民的生命安全。     

陈子龙文学思想摭谈

陈子龙所处的时代,经历了多次复古与反复古更迭的文坛并没有大放异彩,明王朝更是内忧外患、风雨飘摇。文坛浅陋、庸俗的诗风并不能承担起拯救时弊的重任。陈子龙在这种情况下祖述六经、力返风雅,承前后七子之余续,宗法唐诗秦文,提出了"文以范古为美"、"诗之为经"、"诗有六义,比兴要焉"等文学主张。强调诗人要忠君爱国、济世安邦,诗歌要雅正崇古、忧时托志。     

基于工作过程的情境教学法在数控铣床实训教学中的研究

本文通过情境教学法,按照工作过程对课程内容进行序化,通过科学的教学设计,将学习领域细化成具体的学习情境。通过六步法,对数控铣床实训教学课程进行研究。     

对日ITO失败案例的分析与思考

日本的海外发包总额中有65%外包业务漉向我国,其中ITO占较大份额,由于中国企业对日ITO服务的经验不足,再加上项目经理大多数没有接受过专门对日ITO项目的正规训练以及专业知识和技巧的不足.造成较多的对日ITO项目的失败.调用一个对日ITO失败的典型案例,并分别在项目管理计划、项目任务和人力资源等方面进行分析.提出一些有益的启示,相信通过本案例的剖析,将有助于中国企业对日ITO的成功.