木霉菌产生的葡聚糖酶和植物病害防治

木霉菌能够产生不同类型的葡聚糖酶，包括α-1，3-、β-1，3-、β-1，4-和β-1，6-葡聚糖酶，酶的产生受葡萄糖抑制，而为葡萄糖聚合体如真菌细胞壁所诱导。已经克隆了几个萄聚糖酶的编码基因。该酶是木霉菌产生的重要抑菌蛋白，能够与几丁质酶或抗生素协同抗菌，用于改良植物病害生物防治菌和植物。     

越南伯克氏菌及其组合生防菌防治黄瓜根结线虫田间试验

为提高越南伯克氏菌及其组合生防菌对蔬菜根结线虫病的田间防治效果,以黄瓜根结线虫为研究对象,采用在整地时添加营养基质、生物菌肥、微生物菌剂,移栽时再穴施微生物菌剂的处理方式,研究越南伯克氏B418及其与蜡样芽胞杆菌BCJB01、木霉菌LTR 2和T11 W的组合菌剂的配套应用技术。结果表明,整地时添加营养基质,可显著提高B418菌剂对黄瓜根结线虫的田间防治效果;组合菌剂处理中,在整地时同时添加生物菌肥和营养基质的处理对黄瓜根结线虫的防治效果好于单加营养基质或生物菌肥处理;B418单一菌剂+营养基质处理优于组合菌剂+营养基质处理, 防治效果为90.05%。     

重组巨大芽孢杆菌在小麦根际的定殖及其对植物真菌病害的防治效果

对含有外源几丁质酶编码基因的重组菌株——巨大芽孢杆菌B13011和B13012进行了小麦根际定殖能力，平板抑真菌能力和盆栽防病试验。两重组菌株均能在小麦根际及根内成功定殖；在盆栽条件下，对小麦全蚀病、小麦纹枯病、棉花立枯病、棉花枯萎病四种真菌病害的防效与受体菌B1301相比达显著性差异(P=0．05，LSR测验)，其中B13011对纹枯病的防治效果达到了81．61％。两重组菌株均能提高受试作物的生物量，其中B13011提高棉花的生物量达39．40％。     

耐盐木霉ST02对番茄种子和幼苗盐耐受能力的影响

木霉菌能够促进植物对盐胁迫的耐受性,研究选用耐盐木霉选择培养基筛选获得的木霉菌株ST02,对其耐盐活性进行检测,具有较强耐盐活性.用ST02木霉菌株的孢子悬液对番茄种子和幼苗进行处理,分析木霉处理对盐胁迫条件下番茄种子萌发,幼苗生长和耐盐生理生化的影响.结果显示:ST02孢子悬液促进NaCl胁迫下番茄种子的发芽率和发芽势,提高200 mmol/L NaCl胁迫下番茄幼苗的存活率、株高和鲜重,以及番茄幼苗的叶绿素含量和净光合速率,影响番茄幼苗的离子渗漏率和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶的活性.说明木霉ST02孢子悬液处理能够通过提高植物的抗氧化防御反应促进番茄对NaCl胁迫的耐受性.     

NaCl胁迫对三叶草种子萌发的影响

研究了不同浓度NaCl溶液胁迫对从澳大利亚引进的3种三叶草（大花三叶草Trifolium michelianum,草莓三叶草Trifolium fragiferum和波斯三叶草Trifolium resupinatum）种子萌发及幼苗生长等相关生理生化特性的影响。研究结果表明NaCl胁迫对三叶草种子萌发和幼苗生长有一定的抑制作用,且抑制程度随着浓度的提高而增加。综合萌发率、芽长、根长、发芽指数、活力指数和种子膜透性等指标,草莓三叶草（Trifolium fragiferum？）表现出较其他2种三叶草更好的耐盐性,具有可推广潜力。     

木霉对棉花枯萎病菌和黄萎病菌的作用机理

木霉对棉花枯萎病菌(Fumrium oxysporum f.sp.Vasinfectum)的幼菌丝具有强烈的寄生能力,对于老熟菌丝的寄生能力较弱。木霉能够产生琼脂扩散性和挥发性抑菌物质。绿色木霉LTR-2产生的挥发性抑菌物质能强烈抑制棉花枯萎病菌的菌丝生长。木霉生物防治作用的另外一种方式是与病原菌竞争营养物质,研究发现葡萄糖是竞争对象之一。木霉具有很强的β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性。培养液中添加几丁质、木霉菌或者棉花枯萎病菌菌丝干粉后培养木霉,培养液上清能够破坏枯萎病菌的菌丝尖端并导致原生质体的泄露,该现象主要与木霉的几丁质酶活性有关。木霉对棉花黄萎病菌具有相同的作用方式。     

重组免疫毒素GnRH-PTD-PE39KDEL的构建及表达

通过引入蛋白质转导域（PTD）,提高免疫毒素人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A衍生物（GnRH-PE39KDEL）对肿瘤细胞的杀伤活性。设计了3条引物,通过2轮PCR在GnRH PE39KDEL基因的人促黄体激素释放激素C端和绿脓杆菌外毒素A衍生物N端引入PTD,获得GnRH-PTD-PE39KDEL基因经酶切后插入pET-His载体,并转化至BL21( DE3)中。采用镍离子螯合层析法纯化诱导表达样品,并进行了生物活性测定。成功构建了免疫毒素表达载体pET-His-GnRH-PTD-PE39KDEL;诱导产物可以实现可溶性表达;表达产物占菌体总蛋白的20%,靶向融合蛋白引入PTD后对人乳腺癌MCF-7细胞的IC50为0.860 μg/mL,表明较GnRH-PE39KDEL生物活性增强。成功地表达了融合蛋白GnRH-PTD-PE39KDEL,为其进一步大规模表达、纯化和功能研究奠定了基础。     

重组人促性腺激素-铜绿假单胞菌外毒素A蛋白的可溶性表达、纯化和对肿瘤细胞的抑制活性

以人促性腺激素-铜绿假单胞菌外毒素A衍生物（GnRH-PE39KDEL）为研究对象,根据大肠杆菌密码子偏好性优化,通过基因合成的方法获得重组蛋白核酸序列,连接至pET-24b载体中,并转化入大肠杆菌BL21 (DE3)及BL21 ( DE3) plyS中进行诱导表达。结果显示,在含有2 mg/mL葡萄糖的LB培养基中37 ℃培养至OD-600约为0.6 h,加入0.2 mmol/L IPTG在30 ℃诱导2 h后,重组蛋白可以实现可溶性高表达。工程菌经超声波破碎、高速离心后,经镍柱纯化和脱盐后得到重组蛋白,蛋白纯度达到95 %以上,蛋白最终得率在2.6 mg/g菌体。重组蛋白经IC-50检测,可以较好地抑制肿瘤细胞株的生长。     

生姜茎尖的组织培养及试管苗快繁体系的研究

以莱芜生姜的茎尖生长点（〈1mm）为外植体,采用不同激素和浓度对生摹的分化进行研究。结果表明：6-苄氨基嘌呤（BA）对姜芽分化最为有效,培养基Ms＋BA5．0mg·L^-1＋NAA0．1mg·L^-1最有利于芽的分化;快繁采用液体浅层静止培养,试管苗增殖速度显著提高,增殖系数比固体培养基提高了31％,根系发达,有利于试管苗的移栽成活。     

一株盖姆斯木霉TW20050的鉴定及功能评价

明确木霉菌株TW20050的分类地位,并评价其生物学功能。通过形态学特征结合ITS、tef1及rpb2序列分析进行种类鉴定,利用菌丝生长速率法测定菌株的抑菌能力,利用透明圈大小定性检测菌株的水解酶活性。结果表明:菌株TW20050的形态学特征与Trichoderma gamsii一致,其ITS、tef1和rpb2序列与Trichoderma gamsii的同源性均达到99%以上,在以rpb2构建的系统发育进化树中,TW20050与Trichoderma gamsii strain S488[KJ665270.1]位于同一分支。菌株TW20050在PDA平板上对10种植物病原真菌均有抑制作用,对终极腐霉的抑制率最高,达92.0%。菌株TW20050具有蛋白酶、几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶及纤维素酶活性,其中蛋白酶活性和纤维素酶活性较高,透明圈宽度分别为9.8 mm和6.5 mm。综合形态学特征和序列分析,将菌株TW20050鉴定为盖姆斯木霉。菌株TW20050不但对植物病原真菌具有广谱抗性,而且具有多种水解酶活性,是一株较有潜力的生物防治菌株。