Tm值差异型不对称PCR方法的建立及其在分子诊断中的应用

多数分子诊断方法对靶基因的检测都是以单链DNA为基础的,如何获得大量和高质量的单链靶DNA分子一直是研究热点.以包含BRCA1基因上3个单核苷酸多态性(SNP)的DNA片段为研究对象,通过调整不对称扩增引物碱基序列组成(5′-端引入错配或加入锁核苷酸(locked nucleic acid,LNA)),使用相差10倍浓度来增加不对称引物间Tm值差异,改进扩增条件(添加增强剂的扩增缓冲液,不同退火温度的二阶循环扩增程序)后,进行不对称扩增来产生大量单链靶DNA产物.结果表明Tm差异型不对称PCR(Tm difference asymmetric PCR,TDA-PCR)可有效提高单链DNA分子产率,降低引物设计难度,也扩大了模板序列的适用范围.此外,还针对禽流感病毒H5N1的血凝素(haemagglutinin)HA基因保守序列进行不对称扩增,用获得的单链DNA为模板进行焦磷酸测序检测,所得结果与参考序列一致且无明显干扰信号.因此,采用Tm值差异型不对称PCR可使焦磷酸测序等分子诊断流程更为简便,成本更低,效率更高,具有很好的通用性和实用性.     

大采高综采煤壁片帮的原因与防治

综合机械化放顶煤开采技术是近些年来发展较快、较为先进的采煤方法之一。它具有单位产高、掘进率低、适用范围广、减少工作面搬家次数、且成本相对较低等优点。但在煤层开采中,特别是仰斜开采时,片帮现象较易发生。如不能及时加以有控制,极易导致上覆煤岩层在支架前端发生冒落现象,就会造成工作面支架前端发生直接顶大面冒落,而影响生产,并给煤矿生产带来极大的不安全隐患。     

警报!你正在被互联网监控

你知道吗？只需从网页上搜集几组数据，就可判断你现在的位置和兴趣。更可-怕的是，你不知道谁会利用这些信息做什么!     

邮政企业领导干部任期经济责任的审计方法

邮政企业结合邮政实际情况制定了《邮政企业领导人员任期经济责任审计实施办法》,使邮政企业领导人员任期经济责任审计也日趋制度化和规范化,并在实际工作中逐步形成经济责任的审计方法。     

陈子龙文学思想摭谈

陈子龙所处的时代,经历了多次复古与反复古更迭的文坛并没有大放异彩,明王朝更是内忧外患、风雨飘摇。文坛浅陋、庸俗的诗风并不能承担起拯救时弊的重任。陈子龙在这种情况下祖述六经、力返风雅,承前后七子之余续,宗法唐诗秦文,提出了"文以范古为美"、"诗之为经"、"诗有六义,比兴要焉"等文学主张。强调诗人要忠君爱国、济世安邦,诗歌要雅正崇古、忧时托志。     

基于工作过程的情境教学法在数控铣床实训教学中的研究

本文通过情境教学法,按照工作过程对课程内容进行序化,通过科学的教学设计,将学习领域细化成具体的学习情境。通过六步法,对数控铣床实训教学课程进行研究。     

对日ITO失败案例的分析与思考

日本的海外发包总额中有65%外包业务漉向我国,其中ITO占较大份额,由于中国企业对日ITO服务的经验不足,再加上项目经理大多数没有接受过专门对日ITO项目的正规训练以及专业知识和技巧的不足.造成较多的对日ITO项目的失败.调用一个对日ITO失败的典型案例,并分别在项目管理计划、项目任务和人力资源等方面进行分析.提出一些有益的启示,相信通过本案例的剖析,将有助于中国企业对日ITO的成功.     

公路路面工程质量管理分析

文章描述了我国公路建设的现状,强调了公路路面工程质量管理的重要性。重点从三个方面分析了公路路面工程质量管理措施,即先要有完整的工程质量保证体系,具有工程质量检测的有力手段;其次,工程质量管理的重点是公路的施工管理,要紧抓工序的管理不放松;最后,要根据操作规程严格执行,质量的管理要规范化。     

论园林景观工程设计及其对房地产的影响

自改革开放以来,人民的生活水平得到了极大的提高,人们也对自己的居住条件提出了更高的要求,这也给国内的房地产行业的开发与设计水平带来了更大的挑战。文章主要从两方面介绍了园林景观工程设计及其对房地产的影响:一是对园林景观工程进行设计时的几点注意事项;二是园林景观工程对房地产项目竞争力所产生的影响