植物钙调素酶联免疫吸附测定（ELISA）酶标一抗竞争法

本实验采用酶标一抗竞争 ELISA 法,完成了以植物 CaM 抗体定量植物 CaM 的方法。本法虽然在测定前需制备标记一抗。但在测定中省去标记二抗,因此快速简便。     

钙调素拮抗剂及钙离子螯合剂对叶绿体CF_1-ATP酶的影响

作为胞内信使的钙离子,在与Calmodulin(钙调素,简称CaM)结合后将其活化,从而调节着生物细胞内多种酶的活性和生理过程。在植物方面,已证实Ca~(2+)·CaM系统至少调节着NAD激酶、Ca~(2+)·Mg~(2+)-ATP酶和NAD奎宁氧化还原酶,以及可能参与光合作用、细胞运动、植物激素反应等生理过程的调节。植物上已初步证实与Ca~(2+)·CaM调节有关的ATP     

ИAD激酶提纯方法研究

本文以豌豆为材料,应用分步离心和柱层析技术提纯NAD激酶,并在提纯过程中,采用Wang和Kaplan等所描述的方法进行NAD激酶活力测定。试验结果表明,本提纯方法是可行的。纯化的NAD激酶能被CaM激活,最高达4.39倍。本试验为进一步建立CaM定量测定的NAD激酶法奠定了基础。     

异三聚体G蛋白参与调节花粉细胞内钙离子浓度

利用激光共聚焦显微镜测定了川百合(Lilium daviddi)花粉细胞内游离钙离子浓度,研究了细胞质膜上异三聚体G蛋白激活剂和抑制剂对花粉细胞内钙离子浓度的影响以及G蛋白激活后钙信号产生的可能途径.结果表明异三聚体G蛋白激活剂霍乱毒素(CTX)可以明显提高细胞内钙离子水平,产生带有一定时空特征的钙信号,而其抑制剂百日咳毒素(PTX)则显著降低细胞内钙离子水平;L型钙通道阻断剂异搏定和IP 3 受体抑制剂肝素都可以明显抑制霍乱毒素引起的钙离子水平升高.由此推断,异三聚体G蛋白可能在花粉细胞内钙离子水平调控过程中发挥重要调节作用,它有可能是通过促进细胞外钙离子内流和细胞内钙库释放两条途径起作用的.     

关于Ca~(2+)-EDTA缓冲系统中[Ca~(2+)]_t的计算

本文在H.D Wolf提出的关于计算低浓度下自由钙离子浓度方程的基础上,进一步导出了在EDTA、pH值及温度一定的条件下配制总[Ca~(2+)]_t的方程(其中允许[Ca~(2+)]<10~(-5)mol/L),并进行了有关计算。计算结果对生物细胞内外自由钙离子的定量研究或Ca~(2+)信使细胞功能的研究提供了方便。     

细胞壁连接的类受体激酶(WAK):植物细胞壁与细胞质联系的重要蛋白

细胞壁连接的类受体激酶(WAK)是一类特殊的植物类受体激酶, 与细胞壁中的果胶共价交联. 在结构上, WAK分为胞外域、跨膜域和胞内激酶结构域, 胞外域中存在保守的EGF重复序列. WAK以多基因家族形成存在, 其表达模式具有组织特异性, 主要在叶、茎中表达, 在功能上参与病原菌反应、细胞伸长调控、铝胁迫反应等. WAK1在细胞外与富含甘氨酸的蛋白质AtGRP3特异结合, 在胞内与蛋白磷酸酶KAPP结合并形成约500 kD的AtGRP3-WAK1-KAPP复合体. 植物中还存在与WAK结构相似的类WAK蛋白(WAKL)家族. 本文结合WAK结构特点和作用机制认为WAK/WAKL可能是植物细胞壁与细胞质进行联系和通讯的重要蛋白.     

细胞外钙调素对转基因烟草悬浮细胞rbcS- GUS基因表达的促进作用

以转ｒｂｃＳ－ＧＵＳ报告基因的烟草悬浮培养细胞为材料,研究了细胞外钙调素对ｒｂｃＳ基因表达的影响,实验证实培养介质中钙调素浓度与ｒｂｃＳ－ＧＵＳ基因表达呈现一个在细胞培养初期较低、随后增高、然后再降低的动态变化;而且培养介质中钙调素浓度变化在前,ｒｂｃＳ－ＧＵＳ基因表达变化在后,介质中加入外源纯化钙调素可以促进ｒｂｃＳ－ＧＵＳ基因表达,而且这种促进作用具有浓度剂化在后,介质中加入外源纯化钙调素可以     

关于两种金属离子[Ca~(2+),Mg~(2+)]—EGTA缓冲系统中总[Ca~(2+)]_t的计算

本文在H.D.Wolf提出的关于计算低浓度下自由钙离子浓度方程的基础上,进一步计算并简化了两种金属[Ca~(2+)]、[Mg~(+2)]离子在EGTA、pH值及温度一定的情况下配制总[Ca~(2+)]t的方程。其中允许[Ca~(2+)]在1×10~(-2)～1×10~(-7)mol/L间取值;[Mg~(2+)]在1×10~(-3)～5×10~(-3)mol/L间取值。根据计算机计算结果提供了部分[Ca~(2+)]与[Ca~(2+)]t关系的表格,为双金属离子[Ca~(2+),Mg~(2+)]缓冲系统的研究提供了方便。     

白芷细胞外ECBP21全长cDNA克隆

ECBP21是从白芷悬浮培养细胞外检测并纯化的一种依赖钙的钙调素结合蛋白。利用RT－PCR和5‘-RACE方法，获得其cDNA全长。ECBP21 cDNA全长947bp，编码216个氨基酸，其中N端1－25氨基酸为信号肽，26－216氨基酸为成熟蛋白肽段，而且26－45氨基酸序列与纯化ECBP21N末端测序结果完全一致。将此cDNA成熟蛋白编码区核苷酸片段导入pET-28b( )表达载体中，并在大肠杆菌表达系统中诱导表达，经CaM-Gel overlay检测证实表达蛋白具有Ca^2 依赖的钙调素结合特征，从而进一步证实了cDNA克隆的正确性。这为进一步用分子生物学方法研究植物细胞外多肽ECBP21的生物学功能奠定了基础。