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尾静脉大容量快速注射法介导的人凝血因子Ⅸ基因在小鼠肝内的高效表达 总被引:3,自引:0,他引:3
尾静脉大容量快速注射裸质粒DNA能够介导外源基因在动物肝内高效表达, 采用此方法将人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)表达质粒pCMV-hFⅨ 2.2 mL于7 s内导入小鼠体内, hFⅨ在小鼠体内表达水平最高为2921 ng/mL(血浆). hFⅨ表达水平与裸质粒DNA注射剂量呈正相关, 重复注射的hFⅨ表达水平偏低(最高1459 ng/mL). PCR检测发现小鼠多种器官中存在hFⅨ cDNA, RT-PCR和免疫组化切片检测表明, hFⅨ mRNA和蛋白主要在肝脏中表达. 转氨酶水平与病理切片检测表明, 注射1 d后5%的肝脏细胞受到损伤, 但在3 ~ 10 d内恢复. 研究结果表明, 尾静脉大容量快速注射法能够介导hFⅨ在小鼠体内高水平表达, 为基因治疗研究提供了一项简便而实用的动物实验手段. 相似文献
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目前基因治疗研究遇到的普遍问题是转染效率低下及目的基因蛋白在活体表达水平较低,其中解决目的基因表达较低的一个重要手段便是基因载体的改造。1990年,Jallat等人在转基因小鼠研究中发现:hFIX cDNA的表达量低,而其余一系列带有完整内含子Ⅰ或中间缺失4.8kb的内含子Ⅰ的转基因小鼠,其表达都和完整的Ⅸ因子表达相仿。这提示Ⅸ因子内含子Ⅰ顺序对其表达有一定的促进作用。1995年,Kurachi等人用含内含子Ⅰ片断的表达质粒转化HepG2细胞,发现瞬间表达要比cDNA高出7倍,其凝血活性和细胞内mRNA水平也有相应数量的提高。本实验室也进行了hFIX intron Ⅰ的研究工作,构建了逆转录病毒载体GlNaCi′IX,但对病毒上清进行RT-PCR检测,发现intron Ⅰ常被不同程度剪切。本文以SNMBAAIXm为蓝本,构建了反向表达载体GlNaPAi′IXBAM,其中Ⅸ因子转录方向与LTR转录方向相反,以期避免病毒包装中将intron Ⅰ剪切掉,使intron Ⅰ结构能够正确引入到靶细胞中,从而提高Ⅸ因子的表达量。 相似文献
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小白鼠口服花生油溶四氯化碳(CCL4)13.95g/kg(公斤体重)至36h诱发肝中毒和口服CCL4前10~20min于腹腔注入DL-半胱氨酸100mg/kg.用凝胶圆盘电泳法显示肝中毒和中毒前腹腔注入DL-半胱氨酸小白鼠的血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶和肝匀浆超氧化物歧化酶(SOD)的谱带变化.结果表明,中毒鼠血清呈现以LDH5带占优势的肝损伤LDH同工酶谱;中毒前腹腔注入DL-半胱氨酸的小白鼠,血清LDH同工酶谱LDH5显著缩减,其它同工酶带几乎未显现.CCL4中毒的肝匀浆SOD谱带与正常鼠比较明显变宽或呈现两条同工酶带;中毒前腹注DL-半胱氨酸的小鼠SOD带与正常鼠略同,但有的仍呈现两条微弱的同工酶带.谱带的这些变化表明,CCL4诱发肝细胞损伤可能与自由基生成和脂质过氧化有关,DL-半胱氨酸则可能具有阻断肝损伤的作用;CCL4肝中毒在诱发自由基生成的同时又刺激了肝细胞SOD活性增强 相似文献
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卢丽萍 《曲靖师范学院学报》1997,(5)
如何培养学生的学习兴趣,开发学生的智能,把学生引入物理学大门,为今后学习物理奠定坚实的基础,这是初中物理启蒙教育的首要任务.本文根据笔者十几年的教学实践认为,在初中的起始教学阶段中应重视认真做好三个“第一” 以及坚持做到“三先三后” 的教学方法,对于提高学习物理的兴趣,有着积极的推动作用. 相似文献
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凝血因子IX的检测是血友病B基因治疗研究中的重要工作,在实验室原有基础上,发现和完善了凝血因子IX在蛋白质水平上的检测系统,为基因治疗血友病B提供了更为直观可靠的依据。首先,建立了以鼠抗人FIX单克隆抗体A-7为一抗的检测活性FIX蛋白量的ELISA法,为检测活性FIX提供了快速简便的方法。其次,实现了用Westernblot法检测转染细胞培养液上清中FIX,确证了体外培养的转有人FIXcDNA细 相似文献
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高海生 《河北科技师范学院学报》1997,(3)
论述了农产品储运与加工专业的学科特点和培养目标,在此基础上指出了实现这一目标的措施与手段,一方面加强专业思想教育,使学生树立坚定的事业心和使命感;另一方面,修订教学计划,组织好教材建设;详细论述了实验教学、参观教学、生产实习、毕业设计等环节在食品科技人才培养中的作用,强调了实践环节和能力培养的重要性。 相似文献
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