血清胸腺因子(FTS)的合成和活性测定

采用芴甲氧羰基（Fmoc）固相肽合成法（Fmoc～SPPS）合成了血清胸腺因子（FTS）,用中压液相阴离子柱一步纯化,经HPLC分析纯度,通过质谱和氨基酸序列测定鉴定合成产物。根据FTS恢复胸腺切除小鼠的脾细胞对免疫抑制荆AZ敏感的特性测定合成FTS的活性。结果表明：化学合成血清胸腺因子的产率为94．7％;纯化后其纯度达到93．7％;质谱测定其相对分子质量为876．6,与理论分子量相符。氨基酸序列测定为NH2／Glu—Ala—Lys—Ser—Gin—Gly—Gly—Ser—Asn,与设计序列一致。实验显示在合成FTS的浓度为10^-14mol／L时尚有部分活力,在10^-13mol／L时能够完全恢复胸腺切除小鼠的脾细胞对AZ的敏感性。     

单链扩增复性法定向克隆蛇毒C型凝集素类蛋白基因

为克隆尖吻蝮蛇C型凝集素类蛋白基因至表达载体pBV220，在该载体的多克隆抗点上选择适当的酶切位点，设计PCR引物：在目的基因上、下游引物的5‘-端分别加上对应于载体的粘性末端序列，建立两个单独反应体系，每个反应体系中只加入一种引物，用Pfu DNA聚合酶催化模板DNA单链扩增；将所得的两种单链产物在适当条件下进行复性后直接与经过酶切的载体DNA连接，并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，获得足够数量的转化子。经PCR鉴定单菌落中有目标DNA片段插入，测序表明克隆连正确，该方法以其简捷性和有效性，为基因的定向克隆提供了一个新的选择。