猪繁殖和呼吸综合征病毒福建毒株ORF5的序列分析及原核表达

根据猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)已发表的核苷酸序列,设计了一对特异性引物(p1/p2),用RT-PCR扩增PRRSV福建毒株FJ-1的全长糖基化囊膜蛋白基因(ORF5),将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,筛选阳性重组质粒进行序列测定与分析.再设计另一条引物(p3)与p2从重组载体pUCm-T-ORF5中扩增出缺失了N端30个氨基酸残基的tGP5的编码序列tORF5,克隆入表达载体pGEX-4T-3后在大肠杆菌中表达.结果表明,FJ-1毒株ORF5基因为603 bp,编码200个氨基酸,与北美型参考毒株VR-2332、CH-1a及欧洲型参考毒株LV的氨基酸同源性分别为87%、89%和53%,推定福建毒株FJ-1属于北美型毒株.原核表达产物经过SDS-PAGE及Western Blot分析,证实为GP5与谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白.分子量为41 kDa.表达量约占菌体蛋白的15%,主要以包涵体形式存在.     

II型猪圆环病毒ORF2基因的原核表达与初步应用

II型猪圆环病毒(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原.本研究用PCR以构建的PCV2 ORF2重组质粒pBS-T-ORF2为模板,扩增截短的ORF2(tORF2)基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒pGEX-tORF2并转化大肠杆菌BL21(DE3).经SDS-PAGE及Western blot鉴定,成功表达了谷胱甘肽S转移酶(GST)融合的tORF2,重组蛋白分子量约为45ku,表达量约为菌体总蛋白的20%,重组蛋白具有良好的免疫学活性.用tORF2重组蛋白对20份临床猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)阳性猪血清进行Western blot检测,有4份(20%)血清显示PCV2抗体阳性,说明PCV2与PRRSV存在共同感染现象.本研究初步证明表达的tORF2重组融合蛋白可以应用于临床检测.     

猪繁殖和呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆与序列分析

根据猪繁殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）已发表的核苷酸序列,设计了1对特异性引物P1／P2,用RT-PCR扩增了PRRSV福建毒株FJ-1和FJ-2的全长核衣壳蛋白基因（ORF7）,将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,提取阳性重组质粒进行序列测定与分析．结果表明：FJ-1和FJ-2毒株ORF7基因均为372bp,编码123个氨基酸,与美洲型参考毒株VR-2332及欧洲型参考毒株LV的核苷酸同源性分别为95．16％,94．35％和61．40％,60．65％,其推导的氨基酸同源性分别为95．93％,95．12％和56．49％,55．73％．研究表明,福建流行的FJ-1和FJ-2属于美洲型PRRSV毒株．     

论离婚案件中半流动家庭留守妇女权益的法律保护

近年来我国半流动家庭的离婚率呈现上升趋势,农村留守妇女群体的婚姻家庭权益保护方面出现一些新情况,有待于通过完善立法规定和强化司法保护来加以解决。应当根据半流动家庭离婚案件和留守妇女权益保护的特殊性,认真贯彻保护妇女权益的立法精神,进一步完善我国《婚姻法》中有关妇女财产权益保障的相关内容,修订离婚诉讼程序的相关规定,加强对留守妇女离婚案件的调解工作,以加大对离婚留守妇女权益的法律保障。     

隐蔽油气圈闭场源信息靶中灰色BP网络标定法

将油气圈闭激发的场源信息视为灰色信息，通过综合关联滤波方法对提取的信息进行灰色优化处理，以突出隐蔽油气圈闭异常，实现隐蔽油气圈产范围、形态、靶中的定位预测，提出了一种耦合灰色系统和神经网络的灰色BP网络方法，实现灰色BP网络滚动训练预测靶位聚集，用该法进行隐蔽油气圈闭靶中标定，可有效克服“矛盾”样本带来的不适性问题，并提高油气圈闭识别经和定位预测的智能性、合理性与准确性程度，在TK测区提取的3个圈闭上进行了“靶中”定位预测，并对测区已出高产油气流的沙四井油气圈闭进行靶中标定，验证效果良好。     

自主创新教育在会计课中的探索与实践

自主创新教育是一种新型的教育理念和教育形式，它的实践对培养学生的实践能力和创新精神具有十分重要的意义。会计教学要实现改革与创新，必须在课堂教学中推广案例教学法，在教学实习中采用合作教学法和计算机辅助教学法，在毕业作业中引入研究性学习。     

用灰色关联法计算储层孔隙度

根据灰色滤波的基本原理 ,设计出一个服从声波时差求取孔隙度的灰色滤波系统。该系统能滤除由探测系统、井通道以及局部环境等因素引起的干扰 ,建立起声波时差与储层孔隙度之间的映射关系计算式 ,由声波时差信号直接计算储层的孔隙度。实际应用表明 ,用灰色关联计算法求得的孔隙度值更接近实际值 ,并且提高了储层的分辨率     

梁董庙构造须家河组砂岩储层地震预测研究

蜀南梁董庙构造须家河组为一套砂泥岩互层的陆相碎屑岩沉积,据钻刹井资料分析得知,砂岩储层含气后的速度与页岩速度相差不大,因而只用速度反演资料不能有效解决该类型储层预浏及烃类识别问题。从测井曲线分析可知,该套砂岩储层还表现出低自然伽玛、相对高孔陈度的测井响应特征。根据自然伽玛进行岩性解释,利用孔陈度数据识别相对孔陈度较高的有利砂岩储层段,最后由低速异常时砂岩含气性进行预浏。通过开展蜀南梁黄庙须家河组砂岩储层的预测研究,取得了较好的地质成果,对该地区的勘探开发具有重要的指导意义。     

浅议桥梁桩基施工溶洞处治措施

桥梁桩基施工中的溶洞处理是桩基施工中经常遇到的难题。本文结合深圳市205国道屯梓河桥旧桥部分桥梁危桥改造工程溶洞处理的实例,概述了其技术措施,以供类似工程参考借鉴。     

浅议桥梁桩基施工溶洞处治措施

当前,大学生轻视和伤害生命的现象屡见不鲜,开展大学生生命教育,引导大学生正确认识生命,建立科学的生命观、人生观是高校思想教育工作者义不容辞的责任。本文将从生命教育的内容、意义到具体实践,阐释大学生生命教育课题。