排序方式: 共有38条查询结果,搜索用时 15 毫秒
31.
32.
反转录病毒介导的人凝血因子IX小基因在奶山羊乳腺中的分泌表达 总被引:1,自引:0,他引:1
通过受精卵显微注射胚胎移植建立哺乳动物乳腺生产系统是近年来生物工程领域的研究热点,但该工作周期长、成本高、难度和工作量都很大.1994年Johanna等人曾经报道以反转录病毒作载体将hGH(human growth hormone)cDNA导入山羊乳腺组织并获得表达.但是由于病毒LTR控制下的hGH基因的表达在活体动物乳腺组织内受到一定程度的抑制,因此表达水平比较低,持续时间短.我们以微小MCK(Muscle creatine kinase)增强子,β-actin启动子控制hFⅨ(human clotting factorⅨ)小基因(minigene)表达顺序反向插入GINa框架,构建为复制缺陷反转录病毒载体.首次通过反转录病毒直接转染活体奶山羊乳腺小叶和乳腺导管导入的方法建立了hFⅨ蛋白的乳腺表达系统.hFⅨ蛋白在羊奶中的最高表达量为47.9ng/mL乳汁,其中1头奶山羊2个月后表达量仍维持在12ng/mL乳汁.Western blot和活性检 相似文献
33.
血友病B基因治疗临床试验的安全性研究 总被引:3,自引:1,他引:3
报道了血友病B基因治疗临床I期试验的安全性研究,包括反转录病毒基因的DNA聚合酶反应(PCR)、反转录PCR(RT/PCR)、Southem杂交以及neo基因和lacZ基因的补求分析(resoueassay).从DNA水平,RNA水平和病毒活性体水平对野生型病毒进行了检测,没有检测到反转录病毒,并对兔和人转基因细胞进行形态学观察,染色体核型分析,软琼脂实验,裸鼠接种实验,兔和裸鼠的病理检测及电镜分 相似文献
34.
以小鼠MAR(matrixattachmentregion)元件,牛β-酪蛋白(β-casein)基因5'端2.0kb调控顺序,人凝血Ⅸ因子小基因(hFIXminigene)构建乳腺组织特异性表达载体,表达载体和质粒pSV-neo共转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),兔皮肤纤维细胞(RSF)和人胚肾上皮细胞(293细胞).发现hFIX基因在CHO细胞中获得低水平表达,最高表达量为7.2ng/ml.在皮肤成纤维细胞中的表达量低于2ng/ml.在293细胞中没有表达.表达载体用stearylamine(SA)脂质体包埋后尾静脉注射哺乳期小鼠,hFIX蛋白在小鼠乳汁中表达水平高达87.34ng/ml. 相似文献
35.
携带人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因重组腺相关病毒的大量制备与体内外表达研究 总被引:1,自引:0,他引:1
构建了一系列携带有人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因(hⅨR338A)及不同调控元件的腺相关病毒 表达载体,并经体外转导不同的细胞系,筛选、优化,挑取高表达质粒及其转导稳定细胞克隆,然后, 以一个携带有腺相关病毒包装蛋白的rAAV/HSV杂合病毒包装系统介导进行重组腺相关病毒的大量制 备,建立了可进行产业化制备的技术路线及高滴度、大量制备重组腺相关病毒的技术方法,所获得的重 组病毒滴度达 1.25 × 1012病毒颗粒/mL,然后,利用这一重组病毒,对rhFⅨR338A进行离体及在体表达, 获得了 rhFⅨR338A在肌细胞系 C2C12及血友病 B小鼠体内的高效表达,表达峰值分别达(2551.32± 92.14)ng·(106细胞)-1·(24h)-1及463.28ng·mL-1,与野生型Ⅸ因子的表达水平(2565.76±64.36)ng· (106细胞)-1·(24 h)-1及453.92 ng· mL-1无显著性差异.然而,其凝血活性却成倍增加,约为后者的 2.46倍..将人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因引入血友病 B基因治疗研究之中,同时,探讨了一个新的包装 系统──rAAV/HSV杂合病毒包装系统──在重组AAV载体大量制备中的应用 相似文献
36.
采用重组小鼠凝血因子Ⅸ制备单克隆抗体的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
将小鼠凝血因子Ⅸ (mFⅨ )cDNA蛋白编码区序列克隆至原核表达载体 pQE30 ,在大肠杆菌M 15中获得高效表达 (约占细菌蛋白总量的 5 1 2 % ) ,并经过SDS PAGE纯化获得均一的重组mFⅨ蛋白 .以此蛋白为抗原 ,免疫Lou/MN系大鼠 ,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞 (Sp 2 / 0 )融合后 ,经 3次克隆化选择获 2株杂交瘤细胞(H4B5和C2B10 ) .以 1× 10 6杂交瘤细胞注射免疫缺陷型裸鼠 ,10d后获得腹水 .对此单抗的功能和特异性初步研究表明 ,所制备的抗小鼠FⅨ单抗可用于Western免疫印迹等研究 . 相似文献
37.
38.