MAPK参与调节猪卵母细胞和受精卵细胞周期的转变

从猪卵巢中获取卵母细胞，在体外成熟，体外受精和电激活后的不同时间采集样品，经裂解变性后利用蛋白电泳和蛋白免疫印迹技术，检测其中MAPK磷酸化变化，并且用免疫荧光化学法观察ERK2的迁移，结果显示，猪卵母细胞中MAPK的量基本不变，体外培养前GV期猪卵内MAPK无磷酸化，培养20h和MAPK开始发生磷酸化，30h时进一步增加，36h时有所下降，40h时达到最高，一直到60h仍未降低，在卵母细胞成熟过程中，ERK2由胞外向胞内迁移，并分布于核区，猪卵母细胞电激活后18，20hMAPK磷酸化降低，几乎被灭活，但22h时开始上升，体外受精12h后MAPK完全去磷酸化，16h时重新磷酸化，以上结果表明，MAPK磷酸化/去磷酸化在猪卵母细胞MⅠ向MⅡ转化，受精后原核的形成及第一次有丝分裂的启动等方面可能发挥重要的调节作用。     

蛋白激酶C在卵母细胞减数分裂成熟和受精中的作用

蛋白激酶C(PKC)是一类广泛分布在真核细胞中的单链丝/苏氨酸蛋白激酶超家族,在卵母细胞成熟和受精的多个环节发挥着重要调节作用.在卵母细胞成熟过程中,PKC的作用决定于它存在的位置:卵丘细胞中PKC的激活能够促进卵母细胞恢复减数分裂,而卵母细胞中PKC的激活却抑制自身的生发泡破裂.PKC活性在卵母细胞成熟过程中逐渐升高,在第一次减数分裂中/后期转换时活性下降,使卵母细胞得以排出第一极体,进入第二次减数分裂.在哺乳动物卵子的受精过程中,PKC可能作为钙离子的下游靶分子,引发皮质颗粒的排放,并使卵子突破MII期阻滞,形成原核.PKC还参与调节其他重要蛋白激酶,如成熟促进因子(MPF)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活性.目前已经在哺乳动物卵子中发现多种PKC亚型,其中经典型PKC可能在卵皮质反应中发挥最主要的作用.结合作者的工作,对目前已知的PKC在减数分裂与受精中的作用进行了评价和展望.     

种间妊娠的研究进展

种间妊娠即胚胎与怀孕母体属于不同种动物的妊娠方式,是异种克隆的关键环节之一。借助于种间妊娠克隆濒危动物已成为人们关注的热点之一。目前,中国与美、日、韩等国在种间克隆大熊猫项目上展开了竞争,使得种间妊娠问题显得尤为重要。在系统介绍了种间妊娠的研究历史、建立方法及有关理论的基础上,着重就种间妊娠的障碍,排除策略和应用前景进行了评述,。     

哺乳动物有性与无性生殖的实验胚胎学研究

近50年来，发育生物学和生殖生物学领域出现了两大突出进展，震撼了生物学界和整个世界。一是哺乳动物精子获能的发现而创建了试管动物和试管婴儿技术，它标志着人们对生殖生理和生殖控制的完善；二是以卵子为受体的克隆动物的诞生，使哺乳动物体细胞克隆成为可能，这标志着人类对生殖和发育机制的发挥和创新，并为人类干预生殖和发育开拓了广阔前景。虽然受精生物学与动物克隆是研究生命启动奥秘的一门学科，已成为生命科学研究的核心之一，但是还有诸多问题亟待发掘并需要深入研究。本文主要从以下两方面介绍20年来在该领域研究中取得的进展与成果：（1） 动物有性生殖研究方面侧重介绍受精机理和显微受精的研究成果；（2） 动物无性生殖研究方面重点介绍克隆牛及其基础研究的进展。     

克隆与大熊猫

体细胞克隆羊多莉的诞生是生命科学领域具有划时代意义的重大突破。现在克隆带来了一些伦理的争论,引发了一些远未解决的问题,因此加强对克隆的研究显得更为重要,更具有重要的意义。体细胞克隆的成功,揭示了体细胞可以在去核(去染色体)的卵胞质中能重新程序化,高度分化的体细胞核内基因组可以逆转。从此宣布人类已经进入高等动物体细胞可以进行无性繁殖(克隆)的新时代。那么何谓克隆?克隆是英文clone的译音,是指由一个细胞祖先经过分裂、增殖而形成的纯细胞系,这个细胞系中的每一个细胞的遗传特性都相同,亦称为     

高氯酸盐生产工艺研究(III)——生产过程中的pH值控制

本文介绍了从盐水精制到三废治理的整个高氯酸钾生产过程中pH值控制的重要意义,作者根据自己的研究和实践,总结、计算提出各工艺的最佳pH值,并阐述了合理pH值的控制办法。     

体细胞克隆牛: 供体细胞和受体的影响

利用体外培养的成年母牛(GN)和公牛(GLV)的外耳成纤维细胞作为核供体, 进行了规模较大的克隆牛研究, 并成功地获得了一批成年体细胞克隆牛犊. 经核移植构建的重构胚的囊胚发育率分别为23.98%(GN, 123/513)和29.55%(GLV, 138/467). 然而, 雌性重构胚(GN)发育满期的比例却明显高于雄性重构胚(GLV), 分别为8.02%和1.82%. 比较了鲁西黄牛、青年Holstein奶牛及经产Holstein奶牛3种不同受体牛的移植效果. 在移植GN重构胚时, 3种受体牛的妊娠率无显著差异, 但黄牛的流产率高达85.71%, 显著高于青年奶牛及经产奶牛的流产率(分别为14.29%和0%, P < 0.05). 黄牛受体生产的克隆牛犊占移植胚胎总数的1.54%, 显著低于青年Holstein奶牛及经产Holstein奶牛(分别是10.39%及20.0%, P < 0.05). 而移植GLV重构胚时, 3种受体牛的妊娠率、流产率及产犊比率均无显著差异.     

精子抗原MSH27参与精卵膜融合过程

利用单克隆抗体技术,从抗顶体反应后精子头的单克隆抗体库中,筛选出一株单抗ＭＳＨ２７,在顶体反应后,抗原定位于精子与卵子质膜融合的起始位置－－精子的赤道段和顶体后区;此抗体能够阻断精卵膜融合,但不影响精子与卵质膜的结合,这种阻断作用呈现抗体剂量依赖性,用含６００μｇ／ｍＬＩｇＭ型单抗ＭＳＨ２７处理精子,受精指数下降９０％,免疫亲合层析分离纯化的抗原（分子量３９ｋｕ）作用于卵子质膜,也可使精卵膜融合指     

非休眠期成年牛耳成纤维细胞用于核移植

哺乳动物的自然生殖方式是有性生殖 ,需要精子和卵子进行受精作用 .核移植技术为哺乳动物无性生殖提供手段 .以前 ,人们多采用未分化或分化不完全的胚胎细胞作为供核细胞 .自Wilmut等人应用成年绵羊体细胞作为供核细胞进行核移植获得全程发育以来 ,体细胞核移植已在多种动物上获得成功 .Wilmut等人认为 ,应用G0 期成年体细胞作为供核细胞是核移植成功的关键 (“G0 期假定”) .为了验证“G0 期假定” ,我们用非休眠期成年牛耳成纤维细胞作为供体 ,以去核牛卵母细胞 (体外成熟 )作为受体进行核移植 .实验中核移植后电融合率达5 1 .6 % ,融合后重组卵卵裂率达 5 4.5 % ,并且有 9.1 %发育到 32细胞期 .这些结果表明 :处于非休眠期的成年牛供核体细胞移植到去核卵母细胞至少能进行早期发育     

受精卵细胞骨架对精核运动作用的研究

Longo和chen 1985年阐明了小鼠卵母细胞的极性起源与核泡破裂和成熟分裂的再启动具有时空上的联系,并指出成熟分裂器染色体的运动依赖于微丝的存在。早期卵裂中有丝分裂器染色体的运动,最近又被作者证明也受微丝所控制。但是,无论是成熟分裂器还是有丝分裂器旋转,它们都是卵子本身的活动,那么异体精子入卵后,它的精核变化与运动是否也受卵子细胞骨架的影响,这个问题目前据我们所知尚未报道过。因此,研究卵细胞骨架在受精过程中对精核运动的作用,是目前要解决的问题。